[转发]ESP全自动快速血培养系统临床应用评价

ESP全自动快速血培养系统临床应用评价

------ 周庭银 赵虎 贺伟 作者单位：上海长征医院
（潘云华供稿）

[摘要] 目的 评价ESP全自动快速血培养系统的功能及影响因素。 方法 应用ESP检测临床标本416份（普通血培养388份，痰结核培养28份），观察其阳性检出率、检出时间，并对所检出的病原菌进行分析。观察不同细菌浓度、温度和放置时间，以及抗生素对检测结果的影响。 结果 388份血培养中检测出阳性标本68株，阳性率为17.3%,假阳性为1.3％，其中24小时内检出67.6%，48小时内检出25％，48小时后检出7.4％。分离出病原菌23个种属。检测速度与细菌浓度成正比；一定量的菌液浓度加入培养瓶内，放置机外不同湿度、不同时间对阳性检出率影响不大，但总的报告时间延长；培养瓶可以中和一定浓度的抗生素。28份抗酸染色阳性的痰液标本，ESP检出结核杆菌25份，与常规培养一致，最快检测时间4.74天，最慢30.93天，平均为15.9天。结论 ESP仪是一种具有多功能的自动化程度高、快速、正确等优点的培养系统。
[关键词] 血培养；结核菌培养；ESP系统

Clinical evaluation of Difco ESP blood culture system Zhou Tingyin, Zhao Hu, He Wei. Shanghai Chang-zheng Hospital, Shanghai 200040.
[Abstract] Objective To evaluate Difco ESP blood culture system and analyze the positive rate effected by different factors. Methods 416 clincal specimens (blood specimen 388 sets, suspicious TB sputum specimens 28 sets) were incubated by ESP. The positive rate, speed, false positive rate and the influent factors were observed and analyzed. Results In a total of 388 blood culture sets, 68 cases were positive (17.3%). Among them, 46 cases (67.6%) positive in less than 24 hours, 17 cases (25%) positive during 24 (48 hours), and 5 cases (7.4%) positive over 48 hours. The incubate speed had good relationship with bacterial concentration in the specimens. The positive rate was not effected when the culture bottles hold in different time and temperature in vitro. And the antibiotics in the specimens could be neutralized by the culture bottle. In the suspicious TB sputum specimens, 25 cases were positive, as the same with the routine culture result. The fastest incubation time of TB was 4.74 days, and the slowest time was 30.93 days. Conclusion Difco ESP blood culture system was a speedy, reliable, and multi-function culture system.

[Key words] Blood culture; Mycobacterium culture; ESP

近年来，自动化非介人性连续瓶外检测的血培养仪已逐渐在国内推广使用，主要机型有Difco公司ESP系统、BD公司的Bactec9000系统和生物梅里埃公司的VITAL系统等，对提高血培养的阳性率，快速准确地作出病原学诊断提供了十分有利的条件。我们引进美国Difco公司研制的最新产品ESP全自动多功能培养系统已近一年，现就临床应用方面的评价报告如下。

材料与方法

1．标本来源：血培养标本来自门诊、急诊及住院疑为菌（败）血症的病人，部分来自外院送检标本。
2．血培养瓶：一次性全封闭血培养瓶为ESP专用瓶，购自威士医疗有限公司。
3．xpy采集与处理：无菌方法采集血标本（成人5~10ml/瓶，儿童1~3ml/瓶），注入ESP需氧菌的专用瓶内。
4．结核菌标本采集与处理：28份抗酸染色阳性的痰液标本各1ml，分别加入2~4% NaOH 2~3ml,充分振荡后放置10~20分钟离心、去除上清，再加入磷酸盐缓冲液中和碱液，离心、去除上清，再加入1ml缓冲液，混匀后加入Myco培养瓶中，同时加入Myco GS助长剂1ml和Myco AS抗生素添加剂0.5ml。痰标本同时作结核菌常规培养。
5．阳性培养瓶的处理：当仪器提示阳性，及时转种血琼脂、巧克力（CO2 环境）和麦康凯平皿，置35℃培养18~24小时。每一阳性培养瓶必须作涂片、革兰染色并作直接药敏试验，将涂片结果通知临床作为血培养的一级报告；培养次日将直接药敏结果通知临床医生作为二级报告；并将分离出的菌落作生化鉴定和药敏试验,经18~24小时培养后，作最终报告（三级报告）。Myco报警提示阳性时，取培养液涂片、抗酸染色、镜检。
6．阴性培养瓶的处理：培养监测5天未显示阳性者，发出无菌生长报告。同时用无菌注射器取血瓶肉汤转种血琼脂和巧克力平皿，置18~24小时培养，如发现细菌生长，经鉴定后补发报告。
7．假阳性、假阴性的判断：报警提示有菌生长，但分离不到细菌为假阳性；5天未显示报警而转种后分离出细菌为假阴性。
8．细菌鉴定：按Microscan仪操作程序进行，辅以常规方法。
9．细菌浓度对检出时间的影响：分别用大肠埃希菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、铜绿假单胞菌（ATCC27853）, 分别制成1×102、1×104 和1×106 CFU/ml 菌液，按常规操作分别注入1ml菌液，置于血培养瓶内，立即放入仪器内，35 ℃孵育。
10．测试瓶放置不同湿度和不同时间后对结果检出的影响：大肠埃希菌（ATCC25922）、金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）制成102 CFU/ml菌 液，分别注入1ml置于血培养瓶内，放置室温15、24小时和冰箱（4℃）18小时后在移入仪器内，35℃孵育。
11．不同浓度的抗生素对培养结果的影响：制备每瓶含有102 CFU/ml大肠埃希菌（ATCC25922）和金黄色葡萄球菌（ATCC25923）菌液，参照标准菌株最低抑菌浓度（MIC）允许范围最高值，将4种抗生素制备该菌株4倍的MIC浓度，将抗生素悬液和菌液各1ml注入培养瓶内，同时将菌液加入不含抗生素的培养瓶内作为对照。
结果
1．检出菌株的种类见表1：338份血标本中共检出68株菌，阳性率为17.3%，其中革兰阳性菌共32株（47.1%）,肠杆菌科细菌22株（32.4%）, 非发酵菌9株（13.2%）,真菌5株（7.3%）。
2．各菌属检出时间见表2：68株菌中，67.6％的细菌在24小时内检出，25％的细菌在24~48小时内检出，7.4%的细菌在48小时后检出。
3．假阳性与假阴性：在388份标本中假阳性5株，假阳性率为1.3%。未发现假阴性。
4．不同浓度的细菌检出时间：结果见表3。
5．测试瓶放置不同温度和不同时间后对结果检出的影响：结果见表4。
6．不同浓度的抗生素对培养结果的影响：结果见表5。

表1 68株临床检出菌株的种类
菌名 菌数 比例％
葡萄球菌属 15 22.1
金黄色葡萄球菌 6
表皮葡萄球菌 4
模仿葡萄球菌 3
溶血葡萄球菌 2
链球菌属 10 14.7
化脓链球菌 4少
酸链球菌 2
米勒链球菌 3
星座链球菌 1
肠球菌属 7 10.3
粪肠球菌 4
屎肠球菌 3
肠杆菌科 22 32.3
大肠埃希菌 9
肺炎克雷伯菌 8
粘质沙雷菌 3
伤寒沙门菌 2
非发酵菌 9 13.2
铜绿假单胞菌 5
鲍曼不动杆菌 4
真菌 5 7.4
白色念珠菌 5

表2 血培养68株菌检出时间
阳性株数（％）菌名 菌株数 ＜24小时 24~48小时 ＞48小时
葡萄球菌属 18 13(72.2) 4(22.2) 1(5.6)
链、肠球菌属 14 8(57.1) 5(35.7) 1(7.2)
肠杆菌科 22 18(81.8) 4(18.2)
非发酵菌 9 7(77.8) 1(11.1) 1(11.1)
白色念珠菌 5 3(60.0) 2(40.0)
合计 68 46(67.6) 17(25) 5(7.4)

表3 3种不同浓度的细菌检出时间
细菌检出时间（小时）
细菌浓度 ATCC25922 ATCC25923 ATCC27853
1000000 3.6 5.6 6.4
10000 5.4 6.8 7.9
100 6.7 8.7 10.4

温度 （小时） 放置时间 细菌检出时间ATCC25922 ATCC25923 ATCC2785325℃ 15 4 6 6
25℃ 24 1.14 3.5 7.6
4℃ 18 5 6.2 7.8
7.结核菌的阳性检出率和检出时间：28份抗酸染色阳性标本，常规结核菌培养和ESP均检出25份阳性，假阳性3份，假阳性率为10.7%。ESP检出最快为4.74天，最慢为30.93天，平均15.9天，较常规培养法快2~3倍。表5 培养瓶对4种抗生素中和能力的结果抗生素 检出细菌时间（小时）
ATCC25922 ATCC25923阿米卡星 19.6 6.4氨苄表霉素 17.1 29.6头孢唑啉 9.2 14.7红霉素 未做 19.8无抗生素（对照瓶） 6.9 8.9
讨论ESP　是一种新的血培养系统，需氧菌12分钟，厌氧菌24分种连续不断地监视，细菌在生长过程中消耗氧，产生二氧化碳、氢气和氮气，导致培养瓶内压力改变，该系统采用气压传感技术，通过压力传感器检测瓶内变化，报警提示有细菌生长 [1]。1．检出的细菌种类多、范围广：68株细菌分布在23个种属，分离率居前三位的细菌是肠杆菌科（32.4％）、葡萄球菌属（22.1%）和非发酵菌（13.2%）。2. 阳性检出的时间快：在检出的68株病原菌中，24小时内检出67.6%，24~68小时内检出25％，48小时后检出7.4%。与国内报道的Bactec系统阳性检出时间基本相似[2] 。加之我们采用血培养阳性结果分级报告制度，从而能很快地为病人诊断和提供试验依据。
3．假阳性：388份标本中假阳性5份，其中3份是由于停电所致，说明停电是引起假阳性的重要原因之一，有条件者可加用不间断电源（UPS），可减少假阳性的发生率。其它2份原因不明。4．检出时间与细菌种类和浓度的关系；检出时间与细菌种类有关，如大肠埃希菌生长较快，检出时间较短。细菌浓度越高，检出时间越短。微量提高血培养的阳性检出率，成人患者的血标本量不应少于5ml。最好多次采血培养，这样更有利于提高血培养的阳性率。5．放置时间和温度对培养结果的影响：将含有细菌的培养瓶放置不同环境、不同时间，检出率影响不大，检出的时间虽有所缩短（如：大肠埃希菌放置24小时后，检出时间仅1.14小时），但总的报告时间延长，因此血培养标本采集后，应及时送实验室，使病人及时得到诊治。6．抗生素对检出结果的影响：该培养瓶能在一定程度上中和抗生素的抑菌作用。在培养瓶内加入不同种类的抗生素，阳性检出率没有变化，仅检出时间稍为延长。培养瓶内并未含有树脂等抗生素吸附剂或其它中和剂，其中和抗生素的机理主要为稀释作用。该培养瓶液体容量大（80ml），一般抽血量为5ml，血液及其中的抗生素被稀释至1:16，抗生素对细菌的生长无明显的抑制作用[3]。
7．该系统还可快速检测结核分枝杆菌：28份标本中3份假阳性。假阳性与痰标本处理过程中杂菌杀灭不完全有关。故建议痰结核标本经消化处理后应同时做普通细菌培养，可排除假阳性。ESP培养结核分枝杆菌速度较常规培养法快2~3倍。综上所述，ESP检出细菌的种类多，并能在一定程度上中和抗生素的抑菌作用，速度快，能为临床诊治败（菌）血症和结核病提供快速病原学诊断，是一种较好、多功能的全自动培养系统。

参考文献
Morello JA, et al. Detection of bacteremia by Difco ESP blood culture system. J Clin Microbiol, 1994, 32(3):811.许淑珍，等。 Bactec9120血培养系统检测细菌影响因素的探讨。中华医学检验杂志，1997，20（5）：272。蔡文城主编。血液培养。临床微生物诊断学（8thed.）.1998,119.