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[分享]奥林巴斯反应曲线详解

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张迪 发表于 2013-12-7 12:40 | 显示全部楼层 |阅读模式

Olympus AU640全自动生化分析仪是日本奥林巴斯生产的大型生化分析仪,该仪器具有精确、灵敏、高速、低耗等特点,分析速度达到800测试每小时,且能实现对反应全过程的监测。Olympus AU640的反应曲线是该仪器的一大亮点,通过查看反应曲线和反应数据,能给用户还原一个完整的反应过程,这对用户发现和解决问题提供了一个很好的线索,几乎所有与结果有关的故障,都可以在反应曲线上找到原因[1]
1、反应曲线的解析
通过User---Reaction Monitor菜单,可以进到反应监测界面。
在反应监测界面的左边能提供很多信息,如发生反应的杯号、搅拌棒号、反应所采取的方法、读点的设置、做光电校正(photocal)以及试剂空白的日期等,右边为反应曲线,见图1。该图是血清碱性磷酸酶(ALP)测试反应曲线,双试剂(所用试剂为北京利德曼厂家生产)。
1.1反应曲线的纵坐标为原始吸光度(OD):奥林巴斯仪器大部分项目设置的都是双波长,蓝色曲线为主波长的反应曲线,绿色曲线为副波长的反应曲线,主、副波长吸光度之差为反应的吸光度,一般用黑线表示;纵坐标的间隔是不固定的。
1.2 反应曲线的横坐标是测量周期:奥林巴斯设计的是18秒一个读点,10min总共27读点。
1.3 奥林巴斯AU640把双试剂反应分为5个部分,如图1所示: 


1 ALP反应曲线

A点: 0点,加入试剂1R1);B: 0点到1点之间,加入标本(S)且搅拌;C: 1点到10点之间,为R1+S的孵育时间;D: 1011点之间,加入试剂2R2)且搅拌;E段:11点直至反应结束。单试剂只是少了DE两步,就不再单独说明。
1.3.1 A点,加入试剂1
A点加入试剂1,这一点的吸光度实际为试剂1的试剂空白的吸光度。对于不同厂家的试剂,A点的吸光度是不一样的,如利德曼的ALP试剂1中不含有发光物质或有效物,试剂空白吸光度较低,说明书对其要求是小于0.6,如上图的0.03左右是正常的。应该经常把该点的OD值与做试剂空白时0点的OD值进行比较,如相差较大,可考虑试剂失效,如可排除试剂失效的原因,重新做该项目的试剂空白。
1.3.2 B段,加入标本
在加入标本之后,由于标本本身是有颜色的,必然导致吸光度的变化。标本自身颜色深浅不一,吸光度的变化也不尽相同。如果我们在反应曲线上能清晰看到这一段吸光度的变化,说明标本是加入反应杯中了。
1.3.3 C段,试剂1和标本孵育时间
此段时间,试剂1和标本在37℃的恒温环境下进行孵育,吸光度会有一些细小的变化但基本上呈一条平稳的直线,如果呈不规则变化,如波浪样或尖峰样突起,可能是标本或试剂中含有气泡、搅拌棒打杯。
1.3.4 D段,加入加入试剂2
由于利德曼的大部分发光物质或有效物质都是在试剂2中,加入试剂2后,吸光度会有一个很大的变化。如ALP试剂2中的对硝基苯磷酸二钠是试剂的有效物质,本身是无色的,但是其在碱性磷酸酶作用下,生成淡黄色对硝基苯酚,后者在405nm处有特异吸收峰,通过测量在405nm处吸光度的变化速率来计算标本中ALP的活性。而如果自10点以后吸光度没有明显的变化,可以考虑试剂2由于某种原因没有加进反应系统中或试剂2失效。
1.3.5 E段,11点直至反应结束

这时的反应曲线变化取决于当前测试所采取的方法。终点法、固定法、速率法都有各自的特点,特别要注意的是说明书中对反应方向的描述,如果出现与预期方法学和反应方向不匹配的反应曲线,可以考虑试剂是否失效、试剂摆放错误、对试剂说明书的解读错误等。
要理解反应曲线,首先应该要知道生化分析仪的反应过程及反应曲线的设置。以上是我用的AU640的一些设置和自己的一些理解,希望对你有用。

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马增举 发表于 2013-12-19 13:40 | 显示全部楼层
受教,学习!
杜兴江 发表于 2014-2-25 16:22 | 显示全部楼层
一目了然,辛苦了
张志宇 发表于 2014-3-17 21:28 | 显示全部楼层
讲得很详细!
ILUAY7 发表于 2014-11-3 15:42 | 显示全部楼层
十分感谢,收藏了。
啡色 发表于 2014-11-3 16:19 | 显示全部楼层
大爱,非常好!
hesongqing 发表于 2015-4-23 21:39 | 显示全部楼层
感谢分享
寂寞山山 发表于 2015-4-27 15:24 | 显示全部楼层
有点疑问,主波长是蓝色的,主减副波长是黑色的,而副波长吸光度并不为零,为什么黑色曲线和蓝色曲线会重合
丰声月影 发表于 2015-5-5 14:41 | 显示全部楼层
打好基础
ndxq2012 发表于 2015-8-27 09:39 | 显示全部楼层
讲的很详细
璞玉 发表于 2015-8-28 09:41 | 显示全部楼层
讲的不错。针对基础
houniao 发表于 2016-1-8 11:54 | 显示全部楼层
学习了
houniao 发表于 2016-1-8 15:48 | 显示全部楼层
很是感谢楼主分享
kenyuwang 发表于 2016-6-15 13:35 来自手机 | 显示全部楼层
讲解十分详细
kenyuwang 发表于 2016-6-16 18:41 来自手机 | 显示全部楼层
请问10分钟共600秒,大约是34个读点。那么27个读点的计算是怎么得来的?
郑振寰 发表于 2016-6-16 20:53 | 显示全部楼层
kenyuwang 发表于 2016-6-16 18:41
请问10分钟共600秒,大约是34个读点。那么27个读点的计算是怎么得来的?

AU的机器做不到10分钟,只有8分半左右的样子,一共28个读点P0-P27,18秒一个读点。
kenyuwang 发表于 2016-6-17 07:27 来自手机 | 显示全部楼层
明白了。10分钟的反应时间是一个通用的反应时间吧,对各仪器来说。仪器之间略有差异。我的理解对吧?
郑振寰 发表于 2016-6-17 09:14 | 显示全部楼层
kenyuwang 发表于 2016-6-17 07:27
明白了。10分钟的反应时间是一个通用的反应时间吧,对各仪器来说。仪器之间略有差异。我的理解对吧? ...

是的,有的仪器是固定时间,如东芝和AU等;有的仪器时间可选,从2分钟到22分钟,如日本罗氏和西门子等
g251720633 发表于 2016-6-17 09:18 | 显示全部楼层
讲的不错!很好理解!
kenyuwang 发表于 2016-6-17 11:39 | 显示全部楼层
郑振寰 发表于 2016-6-17 09:14
是的,有的仪器是固定时间,如东芝和AU等;有的仪器时间可选,从2分钟到22分钟,如日本罗氏和西门子等 ...

多谢!
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