一组生化试剂操作

淀粉酶测定

（碘比色法）手工用

用途

体外诊断用，测定血清或尿中粉酶含量。

方法原理

血清或尿液中的α-淀粉酶（Amy）水解α-1，4葡萄糖苷键，产生葡萄糖，麦芽糖和糊精。加入碘液与未水解的淀粉生成蓝色复合物，与未经反应的空白管比较推算出Amy活力单位。

试剂组成

试剂Ⅰ： 试剂Ⅱ：

可溶性淀粉 0.4g/L 碘贮存液：0.1mol/L

NaCI 0.15mmol/L

测定方法：

测定管 空白管

底物缓冲液（37℃预温5分钟）ml 1.0 1.0

标本（血清或或尿）ml 0.02 —

混匀，37℃水浴7.5分钟（需准确）

碘贮存液ml 0.1 0.1

蒸馏水ml 7.0 7.0

混匀：660 nm波长，蒸馏水校零，读取测定管和空白管A。

空白管A-测定管A

×800=淀粉酶活力单位（U）

空白管A

附注：

1、单位定义：每100 ml血清，37℃，15分钟水解5mg淀粉的酶量为1个活力单位

2、淀粉酶活力＞500单位的标本应稀释后再测定，测定结果乘稀释倍数。

3、同时做多只标本，可只做一只空白管。

参考值

血清：40-200单位

尿液：＜500单位

谷氨酰转移酶测定试剂

方法原理

GLuCANA+gly.gly—Glu.gly.gly+5-氨基-2-硝基苯甲酸

用速率法测定5-氨基-2-硝基甲酸的生成速率,推算出r-GT活力.

试剂组成

本试剂参照国际临床化学联合会(IFCC)亦是中华医学会检验分会(CSMLS)的推荐方法配制.

方法配制.

GluCANA 6.6mmol/L 双甘肽(gly.gly) 165mmol/L

稳定剂包装

试剂Ι:缓冲液 90ml. 试剂Ⅱ: 基质(干粉) 1瓶

工作试剂配制

临用时试剂B加10ml蒸馏水溶解,与试剂A组成双试剂.供可加双试剂的仪器应用.试剂A和B以9:1混匀,既为单一试剂.

试剂稳定性

试剂盒贮4度稳定一年,双试剂贮4度稳定15天。单一试剂贮4度稳定7天。试剂混浊或空白A410nm（1cm光径）＞0。55不能再使用。

仪器要求

各种类型的自动分析仪。

标本制备

血清，采血后及时分离，避免溶血。

测定参数

反应类型：速率法 标本：30ul 延迟时间：30秒

波 长：410或405nm 温度：30或37度 读数时间：60秒

试 剂：300ul 光径：1。0cm 输入常数（K）：1382（410nm）

如用双试剂，A为270ul, B为30ul. 1159 (405nm)

参考值

男性 女性

37度 11-50 IU/L 7-32 IU/L

30度 8-38 IU/L 5-25 IU/L

37度测定得的结果如要换算成30度的结果，可乘系数0。77。

技术指标

空白吸光率：A410nm(1.0cm光径)＜0。5

线性范围：速率法：0-460 IU/L

精密度：批内CV＜4％、批间CV＜6％

α-羟丁酸脱氢酶（液体试剂）——α-HBDH

（紫外动力学法）

原理：

NADH在340nm波长有最大吸收，NADH生成NAD⁺的速率与血清中α-HBDH的活性成正比。在340nm波长下测定NADH下降的速率，既吸光度下降的速率，既可测出α-HBDH的活力。

α-HBDH

NADH+α-酮丁酸+H⁺ ┈┈┈┈α-羟基丁酸+NAD⁺

试剂组成

使用前，按标签说明用定量的缓冲液溶解冻干试剂。

组 成	R1：R2=5：1 混合后溶液的浓度
R1：Tris缓冲液：	500mmol/L PH=7.5
α-酮丁酸	3.3mmol/L
叠氮钠	＜0.1%
R2：起动液
NADH	0.18mmol/L
稳定剂

试剂稳定性

1、原包装试剂2-8℃储存至失效期。本试剂有效期为18个月。

2、R1与R2试剂以5：1比例混合后，2-8℃可稳定8天，18-25℃下可稳定2天。

3、试剂变浑浊。在340nm处吸光度值低于1.000ABS，则试剂失效。

标本收集：

1、样品为血清或肝素抗凝浆或EDTA血浆。不能使用溶血的血清，因为红血球中LDH的活性为正常血清的100倍。

2、血清中α-HBDH在活性在2-8℃可稳定7天。

操作步骤：

标本量	Sample volume	ul	10
试剂1（R1）	Reagent1	ul	200
样本+R1在37℃保温90秒后，加入R2试剂。
试剂2（R2）	Reagent2	ul	40
样本+R1+R2在37℃保温30秒后，测量2分钟内的吸光度变化。
主波长	Main wavelength	nm	340
副波长	Sub wavelength	nm	410
反应类型	Reaction type		速率法（RATE）
反应方向	Reaction direction		降反应（-）
试剂空白吸光度	Reagent limit OD		＞1.0
正常值范围	Normal range	U/L	74-140
线性范围	Linear	U/L	＜400
			(-)4020

手工法测定参数：

试剂1与试剂2按5：1比例混合使用。

试剂：600 ul 血清：20 ul 测定时间：60秒 延迟时间：60秒 波长：340 nm

因数：5000

总胆固醇(CH)测定

（COD-PAP法）分析仪和手工二用

胆固醇酯酶

方法原理

胆固醇氧化酶

胆固醇酯+ H₂O 游离胆固醇+脂肪酸

过氧化物酶

胆固醇酯+O₂ 胆甾烯酮+H2O2

2H₂O₂+4-氨基安替比林+4+氯酚 苯醌亚胺（红色）

试剂组成

4-氯酚 3.5 mmol/L 胆固醇酯酶 ＞800U/L

胆酸钠 4.0 mmol/L 胆固醇氧化酶＞400U/L

Good s缓冲液（PH7.6）300 mmol/L 过氧化物酶＞1000U/L

表面活性剂 适量 4-氢基安替比林 0.5mmol/L

试剂包装

缓冲液：90 ml 酶溶液：10m

参考物：ALBK法定值血清，含量见瓶签。

工作试剂制备

临用时按需将缓冲液和酶溶液以9：1的比例混匀即为单一试剂。

仪器要求和标本制备

自动分析仪或分光光度计，清晨空腹采血，及时分离血清（浆）。

测定方法：

自动分析参数

程序：终点法 标准：按标定值 样本：3ul

波长：500nm 空白：试剂 试剂：300 ul*

反应温度：37℃ 反应时间：10秒 *如为双试剂 R1 270，R2 30。

手工操作分别加血清，标准和生理盐水20ul于测定、标准、空白管中，各和加工作试剂2ml，测定管A/标准管×标准管含量=T-C mmol/L（mg/dl）

参考值：

血清总胆固醇含量有随年龄增高的倾向。＜5.2 mmol/L（200mg/dl）为理想水平，5.2-5.7 mmol/L（201-219mg/dl）为临界水平；＞5.72 mmol/L（220mg/dl）为高水平。

高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）直接测定试剂

（选择性抑制法）分析仪用

方法原理

血清与试剂Ⅰ共同孵育，血清中含apoB的脂蛋白（LDL，VLDL 和CM）与试剂中的聚阴离子和多聚体形成复合体，同时抑制剂（与含apoB脂蛋白有亲和力的表面活性剂）在复合体表面形成遮蔽层，可抑制复合体与胆固醇酶试剂反应，试剂Ⅱ为胆固醇酶法测定试剂，加到反应混合物中后，HDL被裂解，HDL的胆固醇与酶试剂反应并显色。

试剂组成

试剂Ⅰ：聚阴离子 表面活性剂 试剂Ⅱ：胆固醇脂酶 TOOS

多聚体 4-AAP 胆固醇氧化酶 表面活性剂

过氧化物酶

试剂包装

试剂Ⅰ：90 ml 试剂Ⅱ：30ml

校准物：冻干人血清，用时加1 ml蒸馏水复溶，含量见瓶签。

校准物复溶后，置-20℃稳定14天。

标本制备

清晨空腹采血，及时分离血清。

测定参数：

反应类型：二点终点法 反应温度： 37℃ 反应波长：550（主）/600（次）nm

样 本：3ul 空白 R2 测定

R1 300 ul 读数 100 ul 读数

3-5分钟 5分钟

参考值

成年男子 1.35±0.31 mmol/L(51.5±11.7mg/dl)

成年女子 1.42±0.32 mmol/L(54.1±12.0mg/dl)

甘油三酯（TG）测定

（GPO-PAP）分析仪和手工二用

LPL

方法原理

TG+3H₂O 甘油+3脂肪酸

GK

甘油+ATP 3-磷酸甘油+ADP

PDO

GPOL

3-磷酸甘油+2H₂O+O₂ 2H₂O₂+磷酸二羟丙酮

2H₂O₂+4-AAP+4-氯酚 苯醌亚胺（红色）

试剂组成

GK 1000U/L 4-AAP 1.0mmol/L ATP 1.0mmol/L

GPO 3000 U/L 胆酸钠 3.5mmol/L Good,s缓冲液

POD 1000U/L Mgcl₂ 2.5mmol/L 表面活性剂 适量

LPL 3000U/L 4-氯酚 2.5mmol/L

试剂包装

R1：90 ml R2：酶溶液 10ml

三油酸甘油酯水溶液标准：1支（2.26mmol/L）,切勿冰冻。

工作试剂制备

R1和R2混匀即为单一试剂。

仪器要求和标本制备

自动分析仪或分光光度计，12小时空腹血清。

测定方法：

自动分析参数

程序：终点法 标准：2.26mmol/L 反应温度：37℃

波长：500（主）/600（次）nm 样本：6ul 反应时间：10秒

试剂：300 ul

手工操作程序：分别加20 ul标本，标准液和蒸馏水于测定管，标准管和空白管中，各管均加1.0试剂，混匀，37℃水浴10分钟，500 nm波长，空白管校零。读取测定管A和标准管A，按下式计算：（测定管A/标准管A）×2.26=TG mmol/L

附注：

1、操作过程参数，所用器皿应防止甘油类物质或氧化还原性物质的污染。

2、主要干扰：胆红素＞100umol/L，抗坏血酸＞170umolL出现负干扰。血红蛋白＞2g/L出现正干扰。

参考值：

血清TG含量有随年龄增高的倾向。成人的合适TG水平为＜1.7 mmol/L（150mg/dl），＞1.7 mmol/L（150mg/dl）为增高。

血清镁测定试剂

（Calmagite法）自动或手工分析

用途

体外诊断用，测定血清中镁含量。

方法原理

镁离子与Calmagite在碱性溶液中形成桃红色复合物，在530nm波长处有吸收峰。

试剂组成

AMP 100mmol/L 氯化锶 0.48mmol/L

氰化钾 15mmol/L Calmagite 0.11mmol/L

EGTA 0.04mmol/L NaN₃ 1g/L

Trion x-100 适量

试剂包装：

试剂Ⅰ：120ml 试剂Ⅱ：25 ml

镁标准液：（0.823mmol/L,2mg/dl）:2ml

仪器要求：

各种类型的自动分析仪或分光光度计。

标本制备：

采血后及时分离血清，避免溶血。

测定方法：

自动分析参数：

分析类型：终点法 空 白：试剂 标 本：3u l

波 长：530nm 反应时间：60秒 试 剂：300ul*

温 度： 25-37℃ 标 准：0.823mmol/L

分别加30 u l标本，标准和蒸馏水于测定管，标准管和空白管中，各管加显色剂3ml。混匀，用530 nm波长，空白管调零，读取测定管和标准管的吸光率（A），按下式计算：（测定管A/标准管A）×0.823=镁mmol/L

附注：

严重溶血（Hb＞500mg/dl），黄疸（Bili＞8mg/dl）或脂血（TG＞382mg/dl）对结果可有影响。

参考值

0.65-1.05mmol/L(1.6-2.6mg/dl)

血清钙（Ca）测定

（偶氮胂Ⅲ）自动或手工分析

方法原理

PH7.0

钙离子+偶氮胂 钙-偶氮胂络合物（紫蓝色）

钙离子与偶氮胂形成的紫蓝色络合物，在640-650nm波长处有吸收峰，在一定范围内吸光率（A）与钙含量呈正比。

试剂组成

偶氮胂Ⅲ100umo/L PBS 50mmlo/L , PH7.0

试剂包装

试剂：100ml×2 钙标准液（2.5 mmol/L,10mg/dl）：2 ml

仪器要求和标本制备

各种类型的自动分析仪或分光光度计，采血后及时分离血清，避免溶血。

测定参数：

分析类型：终点法 反应时间：180秒 空 白：试剂

波 长：650nm/700nm 标 本：3ul 标 准：2.5 mmol/L

温 度：25-37℃ 试 剂：300ul

此参数可根据实验室的仪器要求作适当改变。

手工操作按下表：

测定管 标准管 空白管

标 本 ul 30 — —

标 准 ul — 30 —

蒸馏水 ul — — 30

显色剂 ml 3 3 3

混匀：置室温3分钟，用650 nm波长，空白管调零，读取测定管和标准管的吸光率（A），按下式计算：测定管A/标准管A×2.5=钙 mmol/L

附注：

1、所用玻璃器皿均需严格洗清，避免微量钙的污染。

2、严重溶血（Hb＞2g/L），黄疸（Bili＞200umol/L）或脂血（TG＞4.5mmol/L）对结果可有影响如用双波长，Hb＜12g/L；Bili＜600 umol/L和TG＜11.3mmol/L均无影响。

参考值

2.0-2.5mmol/L(8.0-10mg/dl).

血清（体液）氯CI测定

（硫氰酸盐比色法）自动或手工分析

方法原理

Hg(SCN)₂+2Cl^- HgCl₂+2SCN^-

3SCN^-+Fe³⁺ Fe(SCN)₃（红色络合物）

试剂组成

硝酸汞 0.5mmol/L 硫氰酸汞 1.0mmol/L

硝酸铁 37.6mmol/L 硝酸 38.4 mmol/L

试剂包装

显色剂 100 ml×2 氯标准液(100 mmol/L):2 ml

标本制备

采血后及时分离血清，避免溶血，体液需离心，取上清液供测定。

测定参数：

分析仪参数

分析类型：终点比色法 反应时间：60秒 空白：试剂空白

波 长：500（主）/600（次）nm 样 本：3ul 标准： 100mmol/L

反应温度：30或37℃ 试 剂：300 ul

手工操作按下表

测定管 标准管 空白管

血清（或体液） ul 30 — —

标准液 ul — 30 —

蒸馏水 ul — — 30

显色剂 ml 3 3 3

混匀后试剂校零，500nm读取各管的吸光率（A），按下式计算：（测定管A/标准管A）×100=氯mmol/L

附注：

尿液中氯含量较高，测定时可将标本稀释2-4倍控制在80-140 mmol/L

参考值

90-104 mmol/L

无机磷测定试剂

（紫外法）分析仪用

方法原理

血清中的无机磷与钼酸铵结合成磷钼酸，可用340 nm直接测定。

试剂组成

钼酸铵 1mmol/L 硫酸 420mmol/L

表面活性剂适量

试剂包装

试剂：100ml 磷标准液：1.29 mmol/L(4.0mg/dl）

标本制备

采血后及时分离血清。

测定方法：

分析类型：终点法 样 本：3ul

波 长：340nm（主）/410nm（次） 试 剂：300 ul

反应温度：30或37℃ 空 白：试剂

反应时间：300秒 标 准：1.29 mmol/L

此参数可根据实验室的仪器要求作适当改变。

附注：

1、枸椽酸盐，草酸和肝素均对测定有影响，不宜用抗凝血浆作标本。

2、严重黄疸，溶血或脂血标本会产生正干扰。

参考值

0.8-1.5mmol/L

乳酸脱氢酶（液体试剂）——LDH-l

（乳酸基质速率法）（L→P）

原理：

乳酸脱氢酶催化L-乳酸与NAD+反应生成NADH。NADH在340nm处有特异吸收峰，其生成的速率与血清中的LDH的活性成正比。在340nm处测定NADH的生成速率，即可测出LDH活性。

LDH

L-乳酸+NAD⁺┄┄丙酮酸+NADH+H⁺

试剂组成：

使用前，按标签说明用定量的缓冲液溶解冻干试剂。

组 成	R1：R2=5：1 混合后溶液的浓度
R1：缓冲液：	PH=9.4
l-乳酸	80 mmol/L
2-氨基-2-甲基1-丙醇	250 mmol/L
叠氮钠	0.1%
R2：起动液
NAD+	9mmol/L
稳定剂

试剂稳定性

1、原包装试剂2-8℃储存至失效期。本试剂有效期为18个月。

2、R1与R2试剂以5：1比例混合后，2-8℃可稳定2天，18-25℃可稳定8小时。

标本收集：

标本为血清、肝素/EDTA抗凝血浆或尿液。

操作步骤：

标本量	Sample volume	ul	4
试剂1（R1）	Reagent1	ul	200
样本+R1在37℃保温30秒后，加入R2试剂。
试剂2（R2）	Reagent2	ul	40
样本+R1+R2在37℃保温90秒后，测量2分钟内的吸光度变化。
主波长	Main wavelength	nm	340
副波长	Sub wavelength	nm	410
反应类型	Reaction type		速率法（RATE）
反应方向	Reaction direction		升反应（+）
试剂空白吸光度	Reagent limit OD		＜0.6
正常值范围	Normal range	U/L	男：80-285
			女：103-227
线性范围	Linear	U/L	＜1000
F值	factor		9807

计算：　　　△A/min×Vt×1000

LDH-L(U/L)=┄┄┄┄┄┄┄┈┈=△A/min×F

e×Vs×d

手工法测定：

试剂1与试剂2按5：1比例混合使用。

试剂：600 ul 血清：10 ul 测定时间：60秒 延迟时间：60秒 波长：340 nm

因数：9807

肌酸激酶测定试剂盒（干粉试剂）——CK

（NAC动力法）

原理：

CK

肌酸磷酸+ACP┈┈肌酸+ATP

_HK

ATP+葡萄糖┈┈葡萄糖-6-磷酸+ADP

_G6PDH

葡萄糖-6-磷酸+NADP⁺┈┈┈6-磷酸葡萄糖+H⁺+NADPH

NADPH在340nm处有特异吸收，通过测定NADPH生成速率计算出CK活性。

试剂组成：按照标签所示，用去离子水或蒸馏水溶解干粉试剂。

组 成	复溶后溶液的浓度
缓冲液：	100mmol/L
N-乙烯半胱氨酸(NAC)	20mmol/L
EDTA	2mmo/L
ADP	2mmo/L
己糖激酶（HK）	3000U/L
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）	3000U/L
D-葡萄糖	20mmol/L
肌酸磷酸	30mmol/L

试剂稳定性

1、原包装试剂2-8℃储存至标签所示失效日期。本试剂有效期为24个月。

2、试剂复溶后，2-8℃可稳定20天。18-22℃下稳定1天。

失效指标：

1、溶解前试剂吸潮或结块。

2、溶解后试剂变浑浊，试剂空白吸光度值在340nm处高于0.70ABS。

标本收集：

1、标本为血清、肝素或EDTA抗凝血浆。

2、标本中CK的活性，在2-8℃24小时或18-22℃1小时至少损失10%。

操作步骤：

标本量	Sample volume	ul	5
试剂（R）	Reagent	ul	200
样本+R在37℃保温120秒后，测量2分钟内的吸光度变化。
主波长	Main wavelength	nm	340
副波长	Sub wavelength	nm	410
反应类型	Reaction type		速率法（RATE）
反应方向	Reaction direction		升反应（+）
试剂空白吸光度	Reagent limit OD		＜0.6
正常值范围	Normal range	U/L	男：＜190U/L
			女：＜167U/L
线性范围	Linear	U/L	＜1200

AST手工法测定参数：

试剂：400 ul 血清：20 ul 测定时间：60秒 延迟时间：60秒 波长：340 nm

因数：3000

葡萄糖Glu测定

（GOD-PAP）自动或手工分析

GOD

方法原理

葡萄糖+O₂+H₂O 葡萄糖酸+H₂O₂

POD

H₂O₂+4-AAP+酚 红色醌亚胺+4H₂O

试剂组成

GOD＞16000U/L 苯酚 10mmol/L 4-AAP2 mmol/L

POD＞1000U/L PBS 100 mmol/L

试剂包装

试剂Ⅰ：缓冲液 90ml×2 试剂Ⅱ：酶溶液 10 ml×2

标准液：5.55 mmol/L(100mg/dl)

工作试剂配制

临用时将试剂Ⅰ和试剂Ⅱ以9：1的比例混匀。

测定方法

自动分析参数

分析类型：终点法 空白：试剂 试 剂：300ul^#

反应温度： 37℃ 标 准：5.55mmol/L 反应时间：10分钟

波 长：500（主）/600（次） 标本：3u l

手工操作按下表：

测定管 标准管 空白管

血清 ul 20 — —

标准 ul — 20 —

工作试剂 ml 2.0 2.0 2.0

混匀：置37℃水浴10分钟，500 nm波长空白管调零，读取测定管和标准管的A值，按下式计算：测定管A/标准管A×标准管浓度=葡萄糖mmol/L(mg/dl)

参考值

3.89-6.11mmol/L(70-110mg/dl)。

尿酸测定试剂盒（液体试剂）——UA

（尿酸酶-POD法）

原理

反应生成的醌亚胺在520nm波长有最大吸收，所产生的颜色强度与血清中尿酸含量成正比，再通过与同样处理的尿酸标准溶液比较，经过计算可求出血清中尿酸的含量。测定尿酸所用的酶反应如下：

尿酸酶

尿酸+O₂——2H₂O┈┈┈尿囊素+CO₂+2H₂O₂

过氧化物酶

H₂O₂+4-氨基安替比林+2、4、6三碘-3-羟基苯甲酸┈┈┈┈┈┈醌亚胺—+H₂O

试剂组成

组 成	R1：R2=5：1 混合后溶液的浓度
R1：磷酸盐缓冲液：	100mmol/L PH=7.8±0.2
2、4、6三碘-3-羟基苯甲酸	5mmol/L
活性剂	2g/L
R2：起动液
尿酸酶	3U/mL
4-氨基安替比林	4.5mmol/L
过氧化物酶	40U/mL
稳定剂

尿酸标准液： 298umol/L(5mg/dl) （或参见瓶签）

试剂稳定性

1、原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。

2、R1：R2=5：1混合后2-8℃可稳定20天，20-25℃可稳定5天。

标本收集：

1、标本为不溶血的血清或肝素、EDTA抗凝血浆。

2、血清中尿酸在2-8℃可稳定三天，在冰冻状态可稳定六个月。

操作步骤：

标本量	Sample volume	ul	4
试剂1（R1）	Reagent 1	ul	200
试剂2（R2）	Reagent 2	ul	40
标本+R1+R2在37℃保温5分钟后，以试剂+水为空白调零，记录吸光度值A。
主波长	Main wavelength	nm	546/（500-550）
副波长	Sub wavelength	nm	700
反应类型	Reaction type		终点法（ENDPOINT）
反应方向	Reaction direction		升反应（+）
正常值范围	Normal range	mg/dl	男：3.4-7.0;女：2.4-5.7
		umol/L	男：202-416;女：142-339
线性范围	Linear	mg/dl	25
		umol/L	1490

计算: A标本

尿酸浓度=┈┈┈┈ ×标准液浓度

A标准

参考值：男210-420umol/L 女：150-350 umol/L

尿素氮测定试剂盒——BUN（液体试剂）

（脲酶UV法）

原理

脲酶催化尿素水解产生氨和CO₂。在谷氨酸脱氢酶催化下，NH₃与α-酮戊二酸和NADH反应生成NAD⁺。NADH在340nm处有特异吸收，通过测定NADH在340nm处反应速度与同样处理时的标准比较计算出尿素氮含量。

尿酸酶

尿素+H₂O┈┈┈NH₃+CO₂

GLDH

NH₃+α-酮戊二酸+NADH┈┈┈┈L-谷氨酸+NAD⁺+H₂O

试剂组成

组 成	R1：R2=5：1 混合后的浓度
R1：TRIS缓冲液：	50mmol/L PH=7.8±0.2
脲酶	≥1000U/L
谷氨酸脱氢酶（GLDH）	≥5400U/L
α-酮戊二酸	15 mmol/L
R2：起动液
NADH	0.18mmol/L

尿素标准： 7.14 mmol/L(43mg/dL)

相当于尿素氮：14.28 mmol/L(20mg/dL)

umol/L(5mg/dl) （或参见瓶签）

试剂稳定性

1、原包装试剂储存在室温至标签所示失效日期。

2、R1与R2试剂以5：1比例混合后，室温可保存一周，2-8℃稳定20天。

标本收集：

标本为血清、肝素抗凝血浆或尿液。

测定参数：

标本量：2 ul 试剂1（R1）：200ul 试剂2（R2）：40 ul

主波长：340nm 副波长：660 nm 反应类型：两点速率法

反应方向：降反应（-）

正常值范围：尿素：10-50mg/dl 尿素氮：4.7-23 mg/dl
尿素：1.7-8.3mmol/L 尿素氮：3.4-16.6

线性范围：＜400 mg/dl 尿素 ＜66.7 mmol/L 尿素

计算: △A标本

尿酸氮/尿素浓度=┈┈┈┈ ×标准液浓度

△A标准

△A=A2-A1

注意事项：

1、样本：R1：R2=1：100：20，检测量可根据需要按比例调节。

2、结果如超过线性范围，请用生理水将标本按1：1稀释，测定结果乘2。

3、1 mmol/L尿素=2 mmol/L尿素氮，1 mmol/L尿素=2.8 mg/dl尿素氮。

尿素氮测定试剂

（二乙酰一肟法）手工用

用途

体外诊断用，测定血清或尿中尿素氮含量。

方法原理

二乙酰一肟与强酸作用生成二乙酰，加热后二乙酰和尿素缩合成二嗪（呈红色）在一定范围内色泽深度与尿素含量呈正比。

试剂组成

试剂Ⅰ：浓硫酸 300ml/L 浓磷酸：100 ml/L 三氯化铁 100mg/L

试剂Ⅱ：二乙酰一肟 5.0g/L 硫胺脲 100mg/dl

测定方法：

接下表加样本和试剂：

测定管 标准管 空白管

血 清(ul) 10 - -

标准液(ul) - 10 -

蒸馏水(ul) - - 10

显色剂(ml) 5 5 5

混匀后置沸水浴10分钟，流水冷却，以525nm波长用空白管调零，读取测定管和标准管的吸光率（A），按下式计算：

（测定管/标准管）×标准管浓度=尿素氮mmol/L(mg/dl)

附注：

1、标本中尿素氮含量超过18mmol/L应稀释后测定。

2、严重黄疸（胆红素＞6mg/dl）和严重溶血（血红素＞120 mg/dl）可使结果偏高。

参考值

1.785-6.783mmol/L(5-19mg/dl)

肌酐（Cr）测定

（速率法）分析仪用

碱性

方法原理

肌酐+苦味酸 肌酐-苦味酸聚合物（紫色）

520nm测定聚合物形成速率，对照标准推算肌酐含量。

试剂组成

苦味酸 8.10 mmol/L 碱性缓冲液，PH ＞13.3

试剂包装

肌酐标准液：血清型，浓度见瓶签。

工作试剂制备

能加双试剂的仪器可直接应用。

标本要求

采血后及时分离血清。

尿液测定需留24小时尿液，加15g硼酸作防腐剂。

测定方法：

自动分析仪的参数

波长：500nm（主）/600 nm（次） 读数时间：30秒

反应温度：37℃ 样 本：30ul

标准：输入定值 试 剂：300 ul*

延迟时间：20秒 *（如为双试剂 R1 230ul，R2 70ul）

参考值：

血清 53-106umol/L（0.9-1.2mg/dl）

尿液 58-117umol/L（1.0-2.0mg/dl）

二氧化碳测定试剂盒（冻干试剂）——CO2

（紫外终点法）

原理：

PEPC

PEP+HCO₃——草酰乙酸+H₂PO₄^-

_MDH

草酰乙酸+NADH+H⁺┈┈苹果酸+NAD⁺

试剂组成

使用前，按标签说明用定量的缓冲液溶解冻干试剂。

组 成	R1：R2=5：1 混合后溶液的浓度
R1：磷酸盐缓冲液：	25mmol/L PH=6.5
Phosphoenolpyruvate(PEP)	6.3mmol/L
NADH	0.45mmo/L
PEPC	200U/L
Mg2+	8.0mmol/L
苹果酸脱氢酶（MDH）	＞600U/L

二氧化碳标准液 25 mmol/L

试剂稳定性

1、缓冲液：应储存在2-8℃，失效期前稳定。

2、CO₂试剂用缓冲剂溶解后，原瓶保存于2-8℃可稳定15天。暴露于空气2-8℃下可稳定70小时，15-25℃可稳定25小时。

3、使用前静置平衡15分钟。

标本收集：

1、血清或肝素抗凝血浆。不能用EDTA、柠檬酸盐和草酸盐作为抗凝剂。

2、在收集处理样本时，尽量减少暴露于空气中的可能。

操作步骤：

标本量	Sample volume	ul	4
试剂（R）	Reagent	ul	300
样本+R在37℃保温240秒后，以试剂空白调零，记录吸光度A。
主波长	Main wavelength	nm	340
副波长	Sub wavelength	nm	380-415
反应类型	Reaction type		终点法（ENDPOINT）
反应方向	Reaction direction		降反应（-）
正常值范围	Normal range	mmol/L	20-29
线性范围	Linear	mmol/L	50

计算: A标本

血清CO₂浓度= ┈┈┈┈ ×标准液浓度

A标准

参考值：

总蛋白测定

（双缩脲法）自动或手工分析

方法原理

按美国临床化学学会（AACC）推荐的候选参考方法配制。

其原理系蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性溶液中能与二价铜离子形成兰紫色络合物。

其色泽与蛋白质含量呈正比。

试剂组成

硫酸铜 3.0g/L 酒石酸钾钠 9.0g/L

氢氧化钠 0.6mol/L 碘化钾 5.0g/L

标本制备

采血后及时分离血清，避免溶血。

测定方法

分析仪参数

分析类型：终点法 空白：试剂空白 波 长：540nm（主）/600nm（次）

温 度： 37℃ 标本：3u l 试 剂：300ul

标 准：按标定值 反应时间：10分钟

手工操作按下表：

测定管 标准管 空白管

血清（浆） ul 50 — —

标 准 ul — 50 —

生理盐水 ul — — 50

双缩脲试剂 ml 2.5 2.5 2.5

混匀：37℃水浴15分钟，用540 nm波长，空白管调零，读取各管的吸光率（A），按下式计算：测定管A/标准管A×标准管浓度=总蛋白g/L

附注：

1、血红蛋白和胆红素可引起干扰，前者1.0 g/L可引起1.8g/L的正干扰；后者300mg/L可引起2.0g/L的正干扰，可作血清空白清除，即用不含硫酸铜的双缩脲试剂代替。

2、右旋糖酐能和试剂中的铜离子结合形成沉淀，可离心后测上清液，不影响结果。

3、脂浊标本可在加双缩脲试剂前先加丙酮，旋涡混匀后离心，去上层液，沉淀供测定。

参考值

60-80 g/L

总胆红素与直接胆红素的测定

实验原理

直接胆红素+苯磺酸————Azobilirubin

咖啡因 （Azobilirubin在540nm有特定吸收峰）

总胆红素 +苯磺酸————Azobilirubin

试剂

1. 盐酸试剂：HCL0.1N

2. 咖啡因： 0.128mole/l

3. 苯磺酸： 7.1mmole/l

4. 亚硝酸钠：25mmole/l

5. 胆红素标准液：171umole/l

注意事项

1． 取新鲜未溶血的血清。

2． 室温下2小时完成实验。

3． 2——10摄氏度下12小时内完成实验。

实验方法

每瓶苯磺酸试剂加入1瓶亚硝酸钠试剂配成偶氮试剂，可稳定7天（2——10摄氏度下蔽光）

温度：25or30摄氏度（单位ml）

	空白对照	标准液	总胆红素	直接胆红素
咖啡因试剂	0.8	0.8	0.8	——
盐酸试剂	——	——	——	0.8
蒸馏水	0.04	——	——	——
标准液	——	0.04	——	——
血清	——	——	0.04	0.04
	混匀后加入	混匀后加入	混匀后加入	混匀后加入
偶氮试剂	0.2	0.2	0.2	0.2

混匀反应5min，在540nm波长下以空白对照组归零后测其吸光度。

测直接胆红素时，空白对照要以盐酸试剂代替咖啡因试剂。

计算

标准液浓度

facter= ———————

标准液吸光度

总胆红素 = 总胆红素吸光度 * facter

直接胆红素= 直接胆红素吸光度 * facter

间接胆红素= 总胆红素—直接胆红素

正常值

成人总胆红素：5.13~20.52umole/l

直接胆红素 ：<3.42 umole/l

间接胆红素 ：3.42~11.97 umole/l