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细胞和分子免疫学实验技术金伯泉第四军医大学出版社 2002-06-30 摘要：本书包括免疫血清的制备，免疫球蛋白的纯化、标记和应用，免疫细胞的分离技术，淋巴细胞增殖功能和杀伤功能的测定，细胞因子生物学活性以及免疫学方法检测等内容。目录：第一章免疫血清的制备I ----------------8 一、兔免疫血清的制备I ----------------8 二、利用NC膜结合抗原制备多克隆抗体 ----------------11 三、新型免疫佐剂(小鼠用)ImmunEasy的应用 ----------------13 第二章小鼠淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 ----------------16 一、细胞融合前准备 ----------------16 二、细胞融合及杂交瘤的选择 ----------------18 三、抗体的检测 ----------------20 四、杂交瘤的克隆化和冻存 ----------------20 五、单克隆抗体的大量生产巧 ----------------22 六、单克隆抗体的鉴定 ----------------23 七、影响因素、失败原因分析 ----------------23 第三章免疫球蛋白纯化技术 ----------------25 一、盐析法纯化人血清免疫球蛋白 ----------------25 二、辛酸一硫酸铵法纯化单克隆抗体 ----------------27 三、DEAE-SephadexA-50柱层析纯化免疫球蛋白 ----------------29 四、QSepharoseFastFlow柱层析纯化小鼠腹水IgGI ----------------31 五、SPA-SepharoseCL-4B亲和层析纯化IgG及IgG亚类 ----------------33 六、高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体 ----------------35 七、单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人a2a干扰素(rHuIFN-a2a) ----------------36 第四章免疫球蛋白标记技术 ----------------38 一、辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体 ----------------38 二、异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体技术 ----------------43 三、藻红蛋白(PE)标记抗体技术 ----------------44 四、生物素标记抗体技术 ----------------46 五、(12)I标记单克隆抗体技术 ----------------49 第五章标记抗体的应用 ----------------51 一、酶联免疫吸附试验(ELISA) ----------------51 二、生物素-亲合素放大的酶联免疫吸附试验(BA-ELISA) ----------------53 三、荧光素-抗荧光素抗体放大的ELISA ----------------56 四、免疫沉淀和免疫印迹(WesternBlotting) ----------------57 五、化学发光免疫分析 ----------------62 六、(125)I标记单克隆抗体竞争结合试验 ----------------65 第六章细胞分离技术 ----------------68 一、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 ----------------68 二、Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化细胞 ----------------72 三、免疫磁珠法分离细胞 ----------------73 第七章溶血空斑形成试验 ----------------77 第八章常用检测免疫细胞膜分子的免疫组化技术 ----------------79 一、亲和免疫细胞化学技术SABC ----------------79 二、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 ----------------81 第九章免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析 ----------------85 一、间接免疫荧光染色和FCM分析 ----------------85 二、直接免疫荧光染色(单色、双色、多色)和FCM分析 ----------------87 三、细胞周期检测 ----------------88 四、应用AnnexinV荧光染色检测细胞凋亡 ----------------89 五、胞内细胞因子以及Thl/Th2和Tcl/Tc2的检测 ----------------91 六、流式细胞术检测细胞黏附功能 ----------------95 第十章淋巴细胞增殖功能的测定 ----------------97 第十一章人脐带静脉内皮细胞的分离培养与增殖试验 ----------------99 第十二章杀伤细胞功能的检测 ----------------102 一、自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活杀伤功能(LAK)的检测 ----------------102 二、混合淋巴细胞培养 ----------------105 三、重导向杀伤功能的检测 ----------------106 第十三章细胞因子生物学活性的检测 ----------------109 一、白细胞介素-1(IL-1)生物学活性检测 ----------------109 二、白细胞介素-2(IL-2)生物学活性检测 ----------------113 三、白细胞介素-4(IL-4)生物学活性检测 ----------------115 四、白细胞介素-6(IL-6)生物学活性检测 ----------------117 五、白细胞介素-10(IL-10)生物学活性检测 ----------------119 六、白细胞介素-15(IL-15)生物学活性检测 ----------------121 七、干扰素(IFN)生物学活性检测 ----------------122 八、凋亡诱导配体生物学活性检测 ----------------124 第十四章细胞因子及其受体的免疫学方法检测 ----------------128 一、夹心ELISA检测可溶性白细胞介素-受体(sIL-2R) ----------------128 二、夹心ELISA检测人白细胞介素-4(1L-4) ----------------129 三、夹心ELISA检测人白细胞介素-6(1L-6) ----------------131 四、夹心ELISA检测人白细胞介素-8(1L-8) ----------------133 五、夹心ELISA检测人r干扰素(IFN-r) ----------------134 六、夹心ELISA检测人a2a,a2b干扰素 ----------------136 七、夹心ELISA检测人肿瘤坏死因子(TNF-a) ----------------137 八、夹心ELISA检测人可溶性TRAIL(sTRAIL) ----------------138 九、夹心ELISA检测可溶性DR4/DR 5 ----------------140 十、酶联免疫斑点法(ELISpot)检测单个细胞水平上产生细胞因子频率 ----------------141 第十五章检测生物大分子相互作用的生物传感器技术 ----------------144 附录：ELISA试剂及器材 ----------------148

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实用免疫学实验技术

分类：免疫分析下载：1 浏览：176 时间：2024-02-15

《实用免疫学实验技术》内容简介：本书共分为12章，着重介绍目前较为广泛应用的免疫学新技术，内容包括抗体制备、免疫亲和层析、免疫印迹、免疫标记、免疫PCR、免疫细胞分离等免疫学实验技术。作者：吴雄文(1) 湖北科学技术出版社 [2002-09-01] -------------------------------------------------------------------------------- 前言 -------------------------------------------------------------------------------- 第一章抗体的制备技术 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节多克隆抗体的制备(抗血清的制备技术) ·第二节单克隆抗体的制备(杂交瘤技术) ·第三节基因工程抗体技术第二章免疫亲和层析技术 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节免疫亲和层析的基本过程 ·第二节免疫亲和层析的主要影响因素 ·第三节免疫亲和层析的操作方案第三章免疫印迹 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节蛋白质的电泳分离 ·第二节将蛋白质从凝胶中转印至膜上 ·第三节免疫检测 ·第四节免疫印迹中需要注意的问题第四章免疫标记技术 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节免疫荧光标记技术 ·第二节免疫酶技术 ·第三节放射性核素标记技术 ·第四节免疫金标记技术第五章免疫学中常用的PCR技术 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节 PCR基本原理和标准PCR方法 ·第二节 PCR反应体系的组成及优化 ·第三节 PCR反应模板的制备 ·第四节 PCR产物的检测 ·第五节免疫学中的特殊PCR技术 ·第六节 PCR技术在免疫学中应用第六章免疫细胞的分离 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节免疫细胞的分离的原理和手段 ·第二节各种免疫细胞的分离与纯化第七章免疫细胞功能的检测 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节免疫细胞数量的检测 ·第二节 T、B淋巴细胞功能测定 ·第三节 NK细胞活性测定 ·第四节中性粒细胞功能测定 ·第五节单核－巨噬细胞功能测定 ·第六节嗜碱性粒细胞功能和红细胞免疫功能的测定第八章细胞因子及其受体的检测 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节细胞因子的生物活性检测法 ·第二节细胞因子及其受体的免疫学检测法 ·第三节细胞因子的分子生物学检测法第九章细胞凋亡的检测方法 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节细胞凋亡的形态学检测方法 ·第二节细胞凋亡检测的生物化学方法 ·第三节免疫学方法(ELISA) ·第四节原位末端转移酶标记技术 ·第五节靶细胞DNA片段的定量分析与杀伤细胞介导的细胞溶解试验 ·第六节流式细胞分析术检测细胞凋亡 ·第七节细胞凋亡的相关蛋白分析第十章 HLA分型技术 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节 PCR－SSOHLA分型技术 ·第二节 PCR－RFLP HLA分型技术 ·第三节 PCR－SSP HLA分型技术 ·第四节常用HLA DNA分型技术的特点和选用第十一章 T细胞克隆技术和HLA／抗原肽四聚体制备技术 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节 T细胞克隆技术 ·第二节 HLA／抗原肽四聚体制备技术第十二章噬菌体展示技术 -------------------------------------------------------------------------------- ·第一节噬菌体展示技术基本原理 ·第二节噬菌体展示技术筛选单链抗体 ·第三节噬菌体展示技术筛选多肽 ·第四节噬菌体肽库的应用附录 -------------------------------------------------------------------------------- ·附录一细胞爬片、甩片或切片的制备和固定 ·附录二蛋白质定量与凝胶染色 ·附录三常用蛋白酶和蛋白酶抑制剂 ·附录四常用发色底物 ·附录五 Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺电泳凝胶的配制 ·附录六实验用小鼠的品系 ·附录七常用溶液的配制参考文献