细胞和分子免疫学实验技术

细胞和分子免疫学实验技术
金伯泉
第四军医大学出版社
2002-06-30
摘要：本书包括免疫血清的制备，免疫球蛋白的纯化、标记和应用，免疫细胞的分离技术，淋巴细胞增殖功能和杀伤功能的测定，细胞因子生物学活性以及免疫学方法检测等内容。
目录：
第一章免疫血清的制备I ----------------8
  一、兔免疫血清的制备I ----------------8
  二、利用NC膜结合抗原制备多克隆抗体 ----------------11
  三、新型免疫佐剂(小鼠用)ImmunEasy的应用 ----------------13
第二章小鼠淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 ----------------16
  一、细胞融合前准备 ----------------16
  二、细胞融合及杂交瘤的选择 ----------------18
  三、抗体的检测 ----------------20
  四、杂交瘤的克隆化和冻存 ----------------20
  五、单克隆抗体的大量生产巧 ----------------22
  六、单克隆抗体的鉴定 ----------------23
  七、影响因素、失败原因分析 ----------------23
第三章免疫球蛋白纯化技术 ----------------25
  一、盐析法纯化人血清免疫球蛋白 ----------------25
  二、辛酸一硫酸铵法纯化单克隆抗体 ----------------27
  三、DEAE-SephadexA-50柱层析纯化免疫球蛋白 ----------------29
  四、QSepharoseFastFlow柱层析纯化小鼠腹水IgGI ----------------31
  五、SPA-SepharoseCL-4B亲和层析纯化IgG及IgG亚类 ----------------33
  六、高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体 ----------------35
  七、单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人a2a干扰素(rHuIFN-a2a) ----------------36
第四章免疫球蛋白标记技术 ----------------38
  一、辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体 ----------------38
  二、异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体技术 ----------------43
  三、藻红蛋白(PE)标记抗体技术 ----------------44
  四、生物素标记抗体技术 ----------------46
  五、(12)I标记单克隆抗体技术 ----------------49
第五章标记抗体的应用 ----------------51
  一、酶联免疫吸附试验(ELISA) ----------------51
  二、生物素-亲合素放大的酶联免疫吸附试验(BA-ELISA) ----------------53
  三、荧光素-抗荧光素抗体放大的ELISA ----------------56
  四、免疫沉淀和免疫印迹(WesternBlotting) ----------------57
  五、化学发光免疫分析 ----------------62
  六、(125)I标记单克隆抗体竞争结合试验 ----------------65
第六章细胞分离技术 ----------------68
  一、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 ----------------68
  二、Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化细胞 ----------------72
  三、免疫磁珠法分离细胞 ----------------73
第七章溶血空斑形成试验 ----------------77
第八章常用检测免疫细胞膜分子的免疫组化技术 ----------------79
  一、亲和免疫细胞化学技术SABC ----------------79
  二、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 ----------------81
第九章免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析 ----------------85
  一、间接免疫荧光染色和FCM分析 ----------------85
  二、直接免疫荧光染色(单色、双色、多色)和FCM分析 ----------------87
  三、细胞周期检测 ----------------88
  四、应用AnnexinV荧光染色检测细胞凋亡 ----------------89
  五、胞内细胞因子以及Thl/Th2和Tcl/Tc2的检测 ----------------91
  六、流式细胞术检测细胞黏附功能 ----------------95
第十章淋巴细胞增殖功能的测定 ----------------97
第十一章人脐带静脉内皮细胞的分离培养与增殖试验 ----------------99
第十二章杀伤细胞功能的检测 ----------------102
  一、自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活杀伤功能(LAK)的检测 ----------------102
  二、混合淋巴细胞培养 ----------------105
  三、重导向杀伤功能的检测 ----------------106
第十三章细胞因子生物学活性的检测 ----------------109
  一、白细胞介素-1(IL-1)生物学活性检测 ----------------109
  二、白细胞介素-2(IL-2)生物学活性检测 ----------------113
  三、白细胞介素-4(IL-4)生物学活性检测 ----------------115
  四、白细胞介素-6(IL-6)生物学活性检测 ----------------117
  五、白细胞介素-10(IL-10)生物学活性检测 ----------------119
  六、白细胞介素-15(IL-15)生物学活性检测 ----------------121
  七、干扰素(IFN)生物学活性检测 ----------------122
  八、凋亡诱导配体生物学活性检测 ----------------124
第十四章细胞因子及其受体的免疫学方法检测 ----------------128
  一、夹心ELISA检测可溶性白细胞介素-受体(sIL-2R) ----------------128
  二、夹心ELISA检测人白细胞介素-4(1L-4) ----------------129
  三、夹心ELISA检测人白细胞介素-6(1L-6) ----------------131
  四、夹心ELISA检测人白细胞介素-8(1L-8) ----------------133
  五、夹心ELISA检测人r干扰素(IFN-r) ----------------134
  六、夹心ELISA检测人a2a,a2b干扰素 ----------------136
  七、夹心ELISA检测人肿瘤坏死因子(TNF-a) ----------------137
  八、夹心ELISA检测人可溶性TRAIL(sTRAIL) ----------------138
  九、夹心ELISA检测可溶性DR4/DR 5 ----------------140
  十、酶联免疫斑点法(ELISpot)检测单个细胞水平上产生细胞因子频率 ----------------141
第十五章检测生物大分子相互作用的生物传感器技术 ----------------144
附录：ELISA试剂及器材 ----------------148

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