第1章 生化基础部分
1.1. 样本
临床实验室测定酶活性的样品很多，有全血、血清、血浆、尿液、脑脊液、胸腔积液和胃液等。由于血清简便易得，既可避免抗凝剂对酶活性的影响，又可防止加抗凝剂振摇引起溶血，故最为常用。
1.1.1. 抗凝剂
抗凝剂种类很多，性质各异，必须根据检验止的适当选择，才能获得预期的结果。现将实验常用抗凝剂及其使用方法简述如下：
1.1.1.1. 乙二胺四乙酸（EDTA）盐
EDTAK2与钙离子结全成螯合物，从而阻止血液凝固。
EDTA盐经1000C烘干，抗凝作用不变，通常配成15g/L水溶液，每瓶0.4ml，干燥后可抗凝5ml血液。EDTA盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会（International committee standard of hematology ,ICSH）1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂，用量为EDTA-K2。1.5-2.2Mg（4.45±0.85μmol）/ml血液。EDTA-Na2与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果，其他抗凝剂不适合于血细胞计数。
1.1.1.2. 枸椽酸钠（trisodium citrate）
枸椽酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。
枸椽酸钠有2Na3C6H5O7。和2Na3C6H5。11H2O等多种晶体。通常用前者配成109mmol/l(32g/l)水溶液（也有用106mmol/l浓度），与血液按1：9或1：4比例使用。枸椽钠对凝血V因子有较好的保护作用，使其活性减低缓，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定。因毒性小，是输积压保养中的成分之一。
1.1.1.3. 草酸钠（sodium oxalate）
草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。
草酸钠通常用0.1mol/L浓度，与血液按1：9比例使用，过去主要用于凝务象检查。实践发现草酸盐对凝备V因子保护功能差，影响凝血酶原时间测定效果；另外由于草酸盐与钙结合形成的是沉淀物，影响自动凝血仪的使用，因此，多数学者认为凝积压象检查选用枸椽酸钠为抗凝剂更为适宜。
1.1.1.4. 肝素（heparin）
肝素广泛在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和暑碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖，是分散物质，平均分子量为15000（2000-40000）。肝素可加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成，对抗凝血酶和阻止血小板聚集等多种作用。生化检验一般用肝素抗凝。
1.2. 常用临床生化项目的分类
1.2.1. 按化学性质分类
大概分为四类：酶类、底物代谢类、无机离子类、特种蛋白类。
1.2.1.1. 酶类
包括ALT（谷丙转氨酶），AST（谷草转氨酶），ALP（碱性磷酸酶），ACP（酸性磷酸酶），r-GT（谷氨酰转移酶），α-HBDH（α羟丁酸脱氢酶），LDH（乳酸脱氢酶），CK（肌酸激酶），CK-MB（肌酸激酶同功酶），α-AMY（淀粉酶），ChE（胆碱脂酶）等。
1.2.1.2. 底物代谢类
包括TG（甘油三脂），TC（总胆固醇），HDL-C（高密度脂蛋白胆固醇），LDL-C（低密度脂蛋白胆固醇），UA（尿酸），UREA（尿素氮），Cr（肌酐），Glu（葡萄糖），TP（总蛋白），Alb（白蛋白），T-Bil（总胆红素），D-Bil（直接胆红素），TBA（总胆汁酸），CO2（二氧化碳）等。
1.2.1.3. 无机离子类
包括Ca（钙），P（磷），Mg（镁），Cl（氯），Fe（铁）等。
1.2.1.4. 特种蛋白类
apoA1（载脂蛋白A1），apoB（载脂蛋白B），Lp(a)（脂蛋白a）；补体C3，补体C4；免疫球蛋白IgA、IgG、IgM等。
1.2.2. 按临床性质分类
无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等；
肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等；
肾功能：UA，UREA，Cr等；
心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，α-HBDH， AST，MSO等；
糖尿病：GLU等；
前列腺疾病：ACP，p-ACP等；
胰腺炎：α-AMY；
血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)；
痛风：UA；
中毒：ChE；
免疫性疾病：C3，C4， IgG，IgA，IgM；
急性炎症反应：CRP（C反应蛋白），AAG（a1酸性糖蛋白），CER（铜蓝蛋白），ASO（抗链球菌溶血素O）。
1.3. 常用临床项目的医学决定水平
医学决定水平（Medicine decide level，MDL）是指不同于参考值的另一些限值，通过观察测定值是否高于或低于这些限值，可在疾病诊断中起排除或确认的作用，或对某些疾病进行分级或分类，或对预后做出估计，以提示医师在临床上应采取何种处理方式，如进一步进行某一方面的检查，或决定采取某种治疗措施等等。
医学决定水平与参考值的根本区别在于：
它不仅对健康人的数值进行研究，以决定健康人的数值区间，同时还对有关疾病的不同病情的数据进行研究，以定出不同的决定性限值。
可提示及引导医师采取不同的临床措施。所医学决定水平看来更合理、更客观、更有助于临床的应用。当然，真正建立起每一项试验的医学决定水平是一个十分复杂的问题，存在着许多的实际困难。
下列为一些常用检验项目的医学决定水平，仅供参考。
1.3.1. 钾
参考值 3.5～5.3mmol/L
3.0 mmol/L 此值低于参考范围下限，若测定值低于此值，可能会出现虚弱、 地高辛中毒和（或）心律失常，应予以合适的治疗
5.8 mmol/L 此值高于参考范围上限。首先应排除试管内溶血造成的高钾。若测定值高于此值，应借助其他试验查找高钾原因，并考虑是否有肾小球疾病。
7.5 mmol/L 高于此值的任何钾浓度都与心律失常有关，故必须给予合适治疗。（首先也应排除试管内溶血造成的高钾）
1.3.2. 钠
参考值 135-145mmol/L
决定水平 临床意义及措施
115mmol/L 等于或低于此水平可发生精神错乱、疲劳、头疼恶心、呕吐和厌食，在110mmol/L时，病人极易发生抽搐、半昏迷和昏迷，故在测定值降至115mmol/L时，应尽快确定其严重程度，并及时进行治疗。
133mmol/L 此值稍低于参考范围下限，测定值低于此值时，应考虑多种可能引起低钠的原因，并加作辅助试验，如血清渗透压、钾浓度及尿液检查等。
150mmol/L 此值高于参考范围上限，应认真考虑多种可能引起高钠的原因。
1.3.3. 氯化物
参考值 96～110mmol/L
决定水平 临床意义及措施
90mmol/L 低于此水平，应考虑低氯血症的多种原因。
120mmol/L 高于此水平，应考虑多种高氯血症的原因，并同时可作多种辅助诊断试验如血清Na、K、Ca、HCT等。
1.3.4. 钙
参考值 2.25～2.65mmol/L
决定水平 临床意义及措施
1.75mmol/L 血钙浓度低于此值，可引起手足抽搐，肌强直等严重情况，故应根据白蛋白浓度情况，立即采取治疗措施
2.74mmol/L 当测定值大于此值时，应及时确定引起血钙升高的原因，其中的一个原因是甲状旁腺机能亢进，所以要作其他试验，予以证实或排除。
3.37mmol/L 血钙浓度超过此值，可引起中毒而出现高血钙性昏迷，故应及时采取有力的治疗措施。
1.3.5. 离子钙
参考值 1.13～1.32mmol/L
决定水平 临床意义及措施
0.37mmol/L 离子钙水平低于此值，常出现腕掌痉挛、手足抽搐、低血压、心律失常等症状，最终可致心脏停止跳动，必须立即采取合适的治疗措施。
3.3mmol/L 测定值在此水平，将导致严重的和持续的心律功能不良，以及血液动力的不稳定。
1.3.6. 磷
参考值 0.96～1.62mmol/L
决定水平 临床意义及措施
0.48mmol/L 等于及低于此值，往往与溶血性贫血有关，应考虑多种治疗方法进行治疗。
0.81mmol/L 此值在参考范围下限以下，低于此值且有高血钙情况时，支持甲状旁腺机能亢进的诊断。
1.62mmol/L 此值为参考范围上限，高于此值应考虑无机磷可能升高的多种原因，尤其应考虑是否有肾功能不全。
1.3.7. 镁
参考值 0.6～1.2mmol/L
决定水平 临床意义及措施
0.60mmol/L 等于或低于此水平时，常有虚弱、易怒、痉挛、震颤等症状，若有上述临床症状并伴有血清镁症降，则应给予适当的治疗。
1.00mmol/L 此值在参考范围以内，如果低镁被认为是临床症状的起因，则测定值高于此值时，应被排除，而应考虑其他病因。
2.5mmol/L 等于或高于此值，已超过参考范围上限，应给予必要治疗，另外，还应检查是否存在肾功能不全。
1.3.8. 铁
参考值 9.0～30.0umol/L
决定水平 临床意义及措施
8.0umol/L 等于或低于此水平，多与缺铁性贫血有关，但作此诊断前，还需证明RBC为小细胞低血色素性且伴有总铁结合力（TIBC）的升高。如果TIBC升高不明显，则血清转铁蛋白降低也有利于此种诊断。
39.4umol/L 等于或高于此水平，可涉及多种疾病，如血色素沉着病，由海洋性贫血，VB6缺乏性贫血等造成红细胞生成减少、溶血性贫血、急性肝损伤等。因此应作多种相应的试验以求确诊，并进行治疗。
71.6umol/L 由于摄入量过多，造成血中水平等于或超过此值时，必须采取合适的治疗措施。
1.3.9. 葡萄糖
参考值 3.61～6.11mmol/L
决定水平 临床意义及措施
2.8mmol/L 禁食后12小时血糖测定值低于此值，则为低血糖症，可出现焦虑、出汗、颤抖和虚弱等症状，若反应发生较慢，且以易怒、嗜睡、头痛为主要症状，则应作其他试验，以查找原因。
7mmol/L 空腹血糖达到或超过此值，可考虑糖尿病的诊断，但应加作糖耐量试验。
10mmol/L 饭后1小时测得此值或高于此值，则可高度怀疑为糖尿病。
1.3.10. 血尿素（Urea）
参考值 3.6～7.1mmol/L
决定水平 临床意义及措施
3.0mmol/L 低于此值常见于血液释放过多或肝功能不全
7.1mmol/L 此值为正常上限，高于此值应考虑能引起尿素升高的多种可能原因，如肾功能不全、高蛋白饮食及上消化道出血等，此时测定血清肌酐有助于正确评价肾脏功能。
14.2mmol/L 高于此值常见于严重的肾功能不全，应选择其他有力的诊断方法及治疗措施。
1.3.11. 尿酸（UA）
参考值 男性120～420umol/L 女性90～360umol/L
决定水平 临床意义及措施
110umol/L 此值在参考下限附近，等于或低于此水平，应采取多种诊断措施，以鉴别各种疾病。
480umol/L 此值高于参考范围上限，等于或高于此水平时，应采取各种诊断措施，鉴别各种疾病。
640umol/L 等于或高于此值，具有形成肾结石或痛风的高度危险，应及时采取适当的治疗措施。
1.3.12. 肌酐（Cr）
参考值 44～133umol/L
40umol/L 在婴幼儿超过此值，应考虑肾功不全的可能性，因此必须进一步作肾脏功能的检查和评价。
141umol/L 成人值若超过此水平，应考虑进一步进行其他肾功能检查试验，如肌酐清除率试验。
530umol/L 高于此水平，几乎肯定有肾功能受损，所以此值具有重要的诊断及评估意义，应及时采取必要的治疗措施。
1.3.13. 总蛋白（TP）
参考值 60～80g/L
45g/L 低于此值往往与水肿有关，应考虑给以相应治疗，同时可作更全面的检查如尿蛋白、肾及肝脏功能等。
60g/L 此为参考范围下限，等于或低于此值时，多种可引起总蛋白偏低的原因均应考虑，并可选择上面的一些试验项目，作进一步检查。
80g/L 高于此值已超出参考范围上限，能引起总蛋白升高的各种原因均应加以考虑，还可通过血清蛋白电泳等项目作进一步检查。
1.3.14. 白蛋白（Alb）
参考值 35～55g/L
20g/L 低于此值，一般在肝病病人提示严重预后不良。还应测定尿蛋白，以查明有无过多的蛋白丢失。
35g/L 此亦为参考值下降，凡低于此值时，各种引起白蛋白降低的因素均应列入考虑范围，如肾病、肝功不全、严重的营养不良、急、慢性炎症、恶性肿瘤等。
57g/L 在此值以上的，应考虑脱水的可能性，并进行红细胞比积测定，以检查其是否增高。
1.3.15. 胆固醇
参考值 2.84～7.11mmol/L
1.81mmol/L 低于此值常提示有严重肝功不全，应考虑适当的诊断及治疗措施，若已知存在肝病，则低于此值提示预后不良。
5.18mmol/L 此为75%的成年男子血中胆固醇值，测定值高于此水平，提示有患冠状动脉粥样硬化的中度危险，故应采取相应措施，如采用低饱和脂肪酸、低胆固醇、高纤维素饮食。
5.70mmol/L 此为90%的成年男子血中胆固醇水平，高于此值有患冠状动脉粥样硬化的高度危险，若病人不接受低胆固醇饮食，则应采用药物治疗。
7.26mmol/L 高于此值会由于患动脉粥样硬化而预后严重，必须及时采取有力的治疗措施，如饮食控制，药物治疗等。
1.3.16. 高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）
参考值 男 1.14～1.76mmol 女 1.22～1.91mmol
0.91mmol/L（男） 低于此值提示易发生冠状动脉性心脏病的危险增加。
1.03mmol/L（女）
1.42mmol/L（男） 高于此水平发生冠状动脉性心脏病的可能性很小。
1.68mmol/L（女）
1.3.17. 甘油三酯（TG）
参考值 0.56～1.70mmol/L（此值因年龄和性别有所差别）
0.45mmol/L 此值正常下限附近，低于此值多与营养不良有关，应进行正确的诊断和治疗。
1.69mmol/L 年轻男性此值接近参考范围上限，为动脉粥样硬化性心血管病的一个危险因子，应给予病人提供合适的预防建议。
4.52mmol/L 高于此水平常预示会发生动脉粥样硬化性心血管疾病，应给予适当治疗，如控制饮食和用降脂药物等。
1.3.18. 胆红素（Bili）
参考值 1.7～18.4umol/L
24umol/L 此水平在参考值范围以上，若测定值超过此水平，各种可能引起Bili增高的原因均应考虑，包括肝功能不全、肝外阻塞、溶血、Gilbert综合征（家族性非溶血性黄疸）。此时进行ALT、AST凝血酶原时间和ALP测定，可帮助确认或排除肝脏疾病
43umol/L 测定值高于此水平往往出现黄疸，当出现黄疸，但Bili测定值又在此水平以下的，则提示应根据这一情况查找原因。
340umol/L 婴胆红素超过这一水平，往往与脑损伤（核黄疸）有关，治疗时应根据临床及其他实验结果考虑换血。
1.3.19. 丙氨酸氨基转移酶（ALT）
参考值 5～40U/L（37℃）
20U/L 此水平在参考范围以内，低于此值可排除许多与ALT升高有关的病种，而考虑其他诊断。此值可以作为病人自身的ALT的对照，与过去和（或）将来的值进行比较。
60U/L 高于此值时，对可引起ALT增高的各种疾病均应考虑，并应进行其他检查以求确诊。
300U/L 高于此值通常与急性肝细胞损伤有关，如病毒性肝炎、中毒性肝炎、肝性休克等，而酒精性肝炎的ALT往往低于此值，其他如传染性单核细胞增多症、多肌炎等也都往往低于此值。
1.3.20. 天门冬氨酸氨基转移酶（AST）
参考值 8～40U/L（37℃）
20U/L 此为排除值，低于此水平时可排除多种与AST增高有关的疾病。因此应考虑其他的诊断。这个参考范围内的值还可作为病人自身对照，可与过去和（或）将来的测定值进行比较。
60U/L 此值高于参考范围上限，当AST测定值超过此水平时，多种与AST增高有关的疾病均应加以考虑，如肝细胞损伤、心肌梗塞、肌肉与骨骼疾患，肝后胆道阻塞等，此时同时测定ALT、ALP、Bili、CK等鉴别是肝脏疾病还是心肌疾患有重要意义。
300U/L 高于此值通常为急性肝细胞损伤，如病毒性肝炎、中毒性肝炎等，而一般酒精性肝炎、心肌梗塞、进行性肌营养不良等测定值均在此水平以下。
1.3.21. 碱性磷酸酶（ALP）
参考值 成人 40～160U/L（37℃） 儿童 50～400U/L
60U/L 此水平在参考范围以内，低于此水平时可以排除许多与ALP升高有关的病种，而考虑其它的诊断。此值可作为病人自身ALP的对照值，可与过去和（或）将来的值进行比。
200U/L 此水平高于成人参考值范围上限，高于此值时，应考虑能引起ALP升高的多种疾病的可能性，如肝脏病变、胆管结石、肿瘤等引起肝外胆汗积郁、成骨细胞瘤、肿瘤等。为进一步鉴别肝胆或骨骼病变，可进行血中r-GT测定。
400U/L 此为儿童参考值范围的上限值，高于此值时，多种可引起ALP升高的病变均应列入考虑范围，但为进一步明确诊断，还应同时进行其他项目的测试。
1.3.22. 淀粉酶（amy）
参考值 60～80 somogyi unites
50 Som U 低于此值应考虑有广泛的胰腺损害或明显的胰腺功能不全，若已确认为胰腺病变，则amy低于此值往往提示有严重的预后。
120Som U 此值在参考值范围之内，若低于此值，在大多数情况下应排除急性胰腺炎的可能性。另外一些疾病，如消化道穿孔、大量酒精摄入，唾液腺体疾病（流行性腮腺炎）、严重肾病、胆结石等可在此值以上。
200Som U 此水平超过参考值上限、若超过此值，同时其他临床及实验室指标也支持的话，可以确诊为急性胰腺炎。
1.3.23. 谷胺酰转移酶（GGT）
参考值 0～50U/L（37℃）
20U/L 此值在参考范围以内，低于此值可排除部分与GGT升高有关的疾病。此值并可作为病人以前或将来的对照值。
60U/L 高于此值应考虑GGT升高的各种可能情况，测定值在60～150U/L范围内，且ALP在正常范围的病人，很可能在测定前有服药和饮酒的情况。
150U/L 高于此值常有肝胆管疾病，应采取各种确诊措施，并进行积极治疗。
1.3.24. 肌酸激酶（CK）
参考值 男 10～200U/L 女 10～170U/L
100U/L 此值在参考范围以内，低于此值则可排除许多种与CK升高有关的疾病，同时此值也可作为病人的对照，用于与以后的CK测定值比较。
240U/L 急性心肌梗塞后1～2天内，可高于此水平，其他有关诊断试验，如CK-MB，可帮助确诊。
1800U/L 当测定值高于此水平时，患其他疾病的可能性高于患单一急性心肌梗塞的可 能，包括横纹肌炎，震颤性谵妄、癫痫等。此时应及时进行其他项目的检验以便确诊。`
1.3.25. 肌酸激酶同工酶（CK-MB）
参考值 0～10U/L
15U/L 高于此值，且有持续性临床表现（胸痛、心电图显示特异性改变等），提示为急性心肌梗塞，应及时进行治疗。
90U/L 高于此值多由于非心肌性CK-MB释放，如恶性肿瘤，应采取其他有关诊断方法，予以确诊。
1.3.26. 乳酸脱氢酶（LDH）
参考值 100～240U/L（L→P）
170U/L 此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除许多与LDH升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。
300U/L 高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。血清溶血可使测定值增高，应予以注意。
500U/L 高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。
1.3.27. C-反应蛋白（CRP）
参考值 <12mg/L
20mg/L 测定值高于此水平，则提示病人有严重的细菌感染、活动性风湿及恶性肿瘤等，应立即给予诊断及采取适当的治疗措施。
1.3.28. 免疫球蛋白G（IgG）
参考值 7.0～16.0g/L(免疫比浊法)
6.0g/L 低于此值多与免疫缺陷病有关
17.0g/L 此水平明显高于参考范围上限，多怀疑有IgG型骨髓瘤，此时应通过骨髓细胞学检查、血清蛋白电泳和免疫电泳来协助诊断。
50g/L 高于此值应高度怀疑患有IgG型单克隆性γ球蛋白病（如IgG型多发性骨髓病）。
1.3.29. 免疫球蛋白A（IgA）
参考值 0.57～4.14g（免疫比浊法）（成年人）
0.40g/L 低于此值与免疫缺陷或IgG、IgM型单克隆γ球蛋白病有关
4.50g/L 此值高于参考值上限，高于此值可怀疑是否有IgG型γ球蛋白病，为此还应做别外的一些试验，如骨髓细胞学检查、血清蛋白电泳、免疫电泳等。
10.0g/L 高于此值则高度怀疑为IgA型γ球蛋白病，如IgG型多发性骨髓瘤。
1.3.30. 免疫球蛋白M（IgM）
参考值 0.50～2.70g/L（免疫比浊法）
0.40g/L 低于此值多与免疫缺陷病有关
3.00g/L 此值超出参考范围上限，高于此值可怀疑有IgM型单克隆γ球蛋白病（如原发性巨球蛋白血症等）
1.3.31. 免疫球蛋白E（IgE）
参考值 成人0～380KIU/L 1～2岁儿童 0～12KIU/L
12KIU/L 1～2岁儿童低于此水平表示无严重过敏的危险性。
60KIU/L 1～2岁儿童高于此水平，提示发生严重过敏的危险性较高。
400KIU/L 成人高于此水平，提示有过敏性疾病，如IgE型骨髓病。
1.4. 生化检验的原理和方法
临床生化检验，主要在技术方法的应用方面上探讨生化检验新技术以及新的标记物的选择和评价，用以帮助诊断，又称“诊断生化”。主要应用了下列技术：光谱技术、电化学分析技术、层析技术、电泳技术、离心技术、抗原抗体特异性反应和标记技术、核酸扩增、杂交及序列分析技术等，其中生化分析仪主要运用了光谱技术中的吸收光谱法和比浊法。分别介绍如下：
1.4.1. 吸收光谱法
比色分析是基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，又称吸收光谱法。有色物质溶液的颜色与其浓度有关。溶液的浓度越大，颜色越深。利用光学比较溶液颜色的深度，可以测定溶液的浓度。
1.4.1.1. 物质的颜色和光的关系
光是一种电磁波。自然是由不同波长（400～700nm）的电磁波按一定比例组成的混合光，通过棱镜可分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种颜色相连续的可见光谱。如下图：
如把两种光以适当比例混合而产生白光感觉时，则这两种光的颜色互为补色。下图中处于同一直线关系的两种色光（如绿与紫、黄与蓝）互为补色。
溶液颜色 绿 黄 橙 红 紫红 紫 蓝 青蓝 青
吸收光 颜色 紫 蓝 青蓝 青 青绿 绿 黄 橙 红
波长／nm 400～450 450～480 480～490 490～500 500～560 560～580 580～600 600～650 650～760
当白光通过溶液时，如果溶液对各种波长的光都不吸收，溶液就没有颜色。如果溶液吸收了其中一部分波长的光，则溶液就蜈现透过溶液后剩余部分光的颜色。例如，我们看到KMnO4溶液在白光下呈紫红色，就是因为白光透过溶液时，绿色光大部分被吸收，而其他各色都能透过。在透过的光中除紫红色外都能两两互补成白色，所以KMnO4溶液呈现紫红色。
同理，CuSO4溶液能吸收黄色光，所以溶液呈蓝色。由此可见，有色溶液的颜色是被吸收光颜色的补色。吸收越多，则补色的颜色越深。比较溶液颜色的深度，实质上就是比较溶液对它所吸收光的吸收程度。
1.4.1.2. 吸光度的定义
一束强度为Io的平行单色光通过一个含有浓度为C的吸光物质、厚度为L的吸收池时，如上图，一些光子被吸收，光强从Io衰减为It，则该溶液的吸光度A等于：
其中 为透光率。
1.4.1.3. 吸收曲线
如果测定某种物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图可得一条曲线，即物质对光的吸收曲线，可准确地描述物质对光的吸收情况。
下图是几种不同浓度的KMnO4溶液的吸收曲线，溶液对波长525nm附近的绿光吸收量最强，而对其他波长的光吸收较弱。光吸收程度最大处的波长叫做吸收波长，用λmax表示。不同浓度的KMnO4溶液所得的吸收曲线，最大吸收波长都一致，只是相应的光被吸收的程度不同。
吸收曲线可作为比色分析中波长选定的依据，测定时一般选择λmax 的单色光作为入射光。这样即使被测物质含量较低也可得到较大的吸光度，因而可使分析的灵每度较高。
若所测定的溶液无色，可在测定前加入适当的显色剂，通过与待测成分的化学反应使溶液晱色即可测定此待测成分。
a. Lamber-Beer定律
其中 为吸光系数，有两种表示方法摩尔吸光系数和比吸光系数，摩尔吸光系数的意义为1摩尔浓度的溶液在厚度为1cm时的吸光度，比吸光系数的意义为浓度为1%(w/v)的溶液在厚度为1cm时的吸光度；C为溶液的浓度；L为吸收池的厚度（单位为cm，亦称光径）。
Lamber-Beer定律的意义为：某溶液的吸光度等于该物质的吸光系数 、浓度C和光径L（cm）的乘积，当光径不变时，浓度和吸光度成正比。这是生化分析仪利用吸收光谱法进行定量测定的基础，见下图：
Lamber-Beer定律成立的前提条件是：(1)被吸收光为单色平行光，(2)待测定溶液为稀溶液。
b. 比浊法
比浊法分两类：透射比浊法和散射比浊法。
带有小粒的悬浮液和胶体溶液都具有向四面八方散射入射光的性质，当一束平行光通过含有悬浮质点的悬浮液或胶体溶液时，同时受到散射和吸收两个因素的影响，使光的强度减弱。在光源的光路方向上测量透射光（实际上还包括散射光）强度与入射光强度比值，并通过该比值测定出悬浮液或胶体溶液中质点的溶度，称为透射比浊法，在光路的其他方向上测定测量散射光强度，从而测定出悬浮液或胶体溶液中质点的溶度，称为散射比浊法。
免疫学方法是以被检测物质作为抗原，然后用免疫动物的方法制备相应的抗体，利用抗原抗体的特异性结合反应来对被检测物质进行定量。影响免疫比浊的因素：1.抗原抗体比例。抗原抗体比例对复合物的数量和颗粒大小关系极大，当抗体>抗原时成正相关，当抗体<抗原时成负相关。2.抗体纯度和效价。3.增聚剂。在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，如3-4％的聚乙二醇等，利用其破坏抗原抗体的水化层，促进其靠近反应，但如浓度不适合，高了会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。
透射比浊法
一束强度为Io的平行单色光通过一个含有悬浮质点（颗粒大小与光源波长接近）的悬浮液或胶体溶液时，如上图，其透射光强度I可用下式表示：
式中，L为悬浮液或胶体溶液在光前进方向上的长度，τ为浊度系数，与悬浮质点的浓度C成线性关系。令τ=2.3KC，则：
该式与Lamber-Beer定律相似，这是生化分析仪利用透射比浊法进行定量测定的基础，该法可以与吸收光谱法共用一个检测器，所有生化分析仪，不需增加任何部件，均可利用此法进行测定。大部分特种蛋白，如载脂蛋白类（apoAI,apoB等）、补体类（C3、C4等）、免疫球蛋白类（IgG，IgM等）等，配以相应的试剂，可利用此法在生化分析仪上进行测定。
散射比浊法
一束强度为Io的平行单色光通过一个含有悬浮质点(颗粒大小远小于光源波长)的悬浮液或胶体溶液时，如上图，与入射光垂直方向上，其散射光强度I可用下式表示：
式中，n1、n2分别表示质点与介质的折射率，ν表示单位体积内的质点数，r表示质点半径。可见散射光强度与悬浮质点的浓度成正比，这是利用散射比浊法进行定量测定的基础，因另需在光路垂直方向上增加一检测器，目前只有极少数生化分析仪可利用散射比浊法进行定量测定，而几乎所有的特种蛋白分析仪、免疫分析仪等都能利用散射比浊法进行定量测定。
1.5. 生化试剂的作用和分类
1.5.1. 生化试剂的作用
a) 显色性
在测定前向血清中加入适当的显色剂（试剂），与待测成分的化学反应使溶液变色即可测定此待测成分。
b) 单一性
不同的试剂和血清中的不同成分反应，引起了吸光度的变化。
1.5.2. NAD+－NADH（NADP+－NADPH）指示系统
1.5.2.1. 反应原理
NADH和NADPH在340nm有特征性吸收峰，而NAD+和NADP+在340nm无特征性吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。
目前利用此指示系统进行测定的临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH 、Glu（己糖激酶法）、UREA、NH4+ 、CO2等
1.5.2.2. 举例说明
ALT（GPT）的测定原理（中生试剂，IFCC）
试剂成分和反应公式：
R1： NADH 、乳酸脱氢酶（LDH）；
R2： L-丙氨酸 、α-酮戊二酸 。
原理：NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降速率与ALT活性成正比(动力学法)。
a-HBDH（LDH1）的测定原理（罗氏试剂，DGKC）
试剂成分和反应公式：
R1：磷酸盐缓冲液，a-酮基丁酸，防腐剂；
R2：NADH，防腐剂。
原理：NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降速率与a-HBDH活性成正比(动力学法)。
1.5.3. p-NP和p-NA指示系统
1.5.3.1. 反应原理
p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有ALP、ACP、r-GT、AMY等。
1.5.3.2. 举例说明
ALP（AKP）的测定原理（罗氏试剂，IFCC）
试剂成分和反应公式：
R1：AMP缓冲液，镁离子，锌离子，PH＝10.44；
R2：对硝基苯磷酸，防腐剂，PH＝8.5
原理：在镁离子和锌离子的存在下，碱性磷酸酶解离对硝基苯磷酸形成磷酸盐和对硝基苯酚，引起405nm吸光度的上升，上升速率与ALP活性成正比（动力学法）。
GGT的测定原理（罗氏试剂，IFCC）
试剂成分和反应公式：
R1：NaOH，双甘肽，PH＝7.7；
R2：L－r－谷氨酰－3－羟基－4－硝基苯氨，防腐剂。
原理：5-氨基-2-硝基苯甲酸的生成，引起405吸光度的上升，上升速率与GGT活性成正比。
1.5.4. H2O2偶联的指示系统
1.5.4.1. 反应原理
H2O2在过氧化物酶的作用下，可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素，导致某一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性。
1.5.4.2. 举例说明
GLU的测定原理（中生试剂）
试剂成分和反应公式：
R1：4-氨基安替吡啉 、抗坏血酸氧化酶 ；R2：葡萄糖氧化酶（GOD）、过氧化物酶（POD）、酚 。
测定原理：醌亚胺的生成，导致500nm吸光度的增加，增加的程度与Glu的含量成正比。
CHOL的测量原理（德赛试剂）
试剂成分和反应公式：
R1：Good’s缓冲液PH＝6.7，苯酚，4－氨基安替比林，CHE（胆固醇脂酶），CHO（胆固醇氧化酶），POD（过氧化物酶）。
测定原理：醌亚胺的生成，导致500nm吸光度的增加，增加的程度与CHOL的含量成正比。
1.5.5. 抗原抗体反应指示系统
1.5.5.1. 反应原理
特异性抗体与抗原(待测物质)在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一定的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比。
目前利用此指示系统进行测定的临床项目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等。
1.5.5.2. 举例说明（略）
1.5.6. 其它显色反应
1.5.6.1. TP的反应原理
蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，导致540nm吸光度的增加，增加的程度与蛋白质的含量成正比。
1.5.6.2. ALB的反应原理
在pH4.2环境中，溴甲酚绿在有非离子去垢剂聚氧乙烯月桂醚（Brij-35）存在时，可与白蛋白形成蓝绿色复合物，导致630nm吸光度的增加，增加的程度与白蛋白的含量成正比。
其它的显色反应还有Ca和Mg等物质的测量方法，这里就不一一举例了。
1.6. 常用临床生化项目的主要测定原理和临床意义
项目 测定原理 临床意义
ALT
NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降速率与ALT活性成正比(动力学法)。 ALT主要存在于肝细胞中，心肌细胞次之，活性升高表示有肝细胞损伤，也可见于心肌及骨骼肌损伤。
AST
NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降速率与AST活性成正比(动力学法)。 AST主要存在于心肌细胞中，肝细胞次之，活性升高表示有心肌损伤，也可见于肝细胞及骨骼肌损伤。
ALP
对硝基苯酚的生成，引起405nm吸光度的上升，上升速率与ALP活性成正比(动力学法)。 ALP主要存在于骨、肝、肾和肠，活性升高见于肝胆及骨骼疾病等。
r-GT
5-氨基-2-硝基苯甲酸盐的生成，引起405nm吸光度的上升，上升速率与r-GT活性成正比(动力学法)。 活性升高与肝胆疾病、心肌梗塞、脑损伤、慢性酒精中毒、苯妥英钠治疗有关。
α-HBDH
NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降速率与α-HBDH活性成正比(动力学法)。 活性升高与急性心肌梗塞有关。
LDH
NADH的生成，引起340nm吸光度的上升，上升速率与LDH活性成正比(动力学法)。 活性升高与心肌梗塞有关,也可见于肝脏疾病、未治愈的恶性贫血、巨幼红细胞贫血、肾脏疾病、恶性肿瘤等。
CK
NADPH的生成，引起340nm吸光度的上升，上升速率与CK活性成正比(动力学法)。 活性升高与心肌梗塞有关,也可见于肌营养不良、甲状腺机能减退、肺梗塞、急性脑血管疾病等。
CK-MB 先用CK-M的抗体抑制CK-M的活性，其余同CK的测定 活性升高主要见于心肌梗塞。
α-AMY
1．用生色基团对-硝基酚修饰α-麦芽七糖苷(PNP-G7)作为底物，经α-淀粉酶水解成小分子的寡糖苷，再经辅助酶α-葡萄糖苷酶进一步水解释放出生色基团PNP，导致405nm吸光度增加，增加速率与α-AMY活性成正比， ROCHE公司等采用此法。
2．用生色基团对-硝基酚修饰麦芽五糖苷(PNP-G5)作为底物，其余同1。日本第一化学采用此法，IFCC推荐。
3．采用2-氯-4-硝基苯酚-α-麦芽三糖(CNP-G3)做底物，不需要用辅助酶，直接由淀粉水解产生CNP，导致405nm吸光度增加，增加速率与α-AMY活性成正比，科华采用此法。 活性升高见于急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、流行性腮腺炎、细菌性腮腺炎等。
TG
醌亚胺的生成，导致550nm吸光度的增加，增加的程度与TG的含量成正比(终点法)。 升高见于肾病综合症、动脉粥样硬化、甲减、糖尿病、肝病等，降低见于营养不良、β脂蛋白缺乏、甲亢、恶液质等。
TC
醌亚胺的生成，导致550nm吸光度的增加，增加的程度与TC的含量成正比(终点法)。 升高见于动脉粥样硬化、肾病、糖尿病、粘液水肿等，降低见于甲亢、贫血、吸收障碍、恶液质等。
HDL-C 沉淀法：先用磷钨酸钠-镁沉淀LDL-C和VLDL-C，再按TC方法测定。
均相法：先用多聚阴离子化合物选择性遮蔽LDL-C和VLDL-C，再按TC方法测定。 含量越低，发生冠心病的危险越大。
LDL-C 沉淀法：先用PVS沉淀LDL-C，再按TC方法测定，TC值减去该测定值即为LDL-C。
均相法：先用多聚阴离子化合物选择性遮蔽HDL-C和VLDL-C，再按TC方法测定。 含量越高，发生冠心病的危险越大。
UA
醌亚胺的生成，导致550nm吸光度的增加，增加的程度与UA的含量成正比(终点法)。 升高与痛风、白血病、妊毒血症、肾病有关。
UREA 二乙酰—肟法：二乙酰—肟与强酸作用生成二乙酰，二乙酰与UREA在酸性条件下，缩合成红色的二嗪衍生物，导致520nm吸光度的增加，增加的程度与UAEA的含量成正比(终点法)。
紫外-谷氨酸脱氢酶法：
NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，单位时间内下降程度与UREA浓度成正比(固定时间法、两点速率法)。 升高主要见于肾脏疾病，也可见于脱水、糖尿病昏迷、肾上腺危相、胃肠道出血、循环虚脱，下降见于严重的肝脏疾病。
Cr 碱性苦味酸法：
肌酐-苦味酸复合物的生成，导致510nm吸光度的增加，单位时间内增加量与Cr浓度成正比(固定时间法、两点速率法)。
肌氨酸氧化酶法：
醌亚胺的生成，导致550nm吸光度的增加，增加的程度与Cr的含量成正比(终点法)。 升高见于肾功能的损伤。
Glu 氧化酶法：
醌亚胺的生成，导致500nm吸光度的增加，增加的程度与Glu的含量成正比(终点法)。
己糖激酶法：
NADH的生成，引起340nm吸光度的增加，增加程度与Glu浓度成正比(终点法)。 升高主要见于糖尿病，也可见于甲亢、垂体或肾上腺机能亢进；降低主要见于胰岛素过量、甲减、垂体机能减退、肾上腺机能减退、葡萄糖吸收障碍。
TP
紫红色络合物的生成，导致540nm吸光度的增加，增加的程度与TP的含量成正比(终点法)。 升高见于各种原因失水、一种或多种球蛋白分泌增多；降低见于营养不良。
Alb
白蛋白溴甲酚绿复合物的生成，导致630nm吸光度的增加，增加的程度与Alb的含量成正比(终点法)。 升高见于各种原因失水；降低见于肝脏疾病、肾病综合症、营养不良、蛋白丢失。
T-Bil
重氮偶合法、比色法、终点法。冻干单剂型
偶氮胆红素的生成，导致545nm吸光度的增加，增加的程度与T-Bil的含量成正比(终点法)。
胆红素 钒酸盐 > 胆绿素
pH3.0表面活性剂
钒酸盐氧化法，比色法，终点法，液体双剂型
胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与总胆红素含量成正比。
升高见于各类肝脏疾病，也可见于溶血性疾病。
D-Bil
重氮偶合法、比色法、终点法，冻干单剂型
偶氮胆红素的生成，导致545nm吸光度的增加，增加的程度与D-Bil的含量成正比(终点法)。
胆红素 钒酸盐 > 胆绿素
pH3.0表面活性剂
钒酸盐氧化法，比色法，终点法，液体双剂型
胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与直接胆红素浓度成正比。
升高见于各类肝脏疾病和胆导阻塞。
NH4+
NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降程度与NH4+浓度成正比(终点法)。 升高见于肝昏迷、肝性脑病。
CO2
NADH的减少，引起340nm吸光度的下降，下降程度与CO2浓度成正比(终点法)。 异常见于酸碱平衡失调。
iP
络合物的生成，引起340nm吸光度的上升，上升程度与iP浓度成正比(终点法)。 升高见于慢性肾炎、甲状旁腺功能减退、VitD过多；降低见于佝偻病、骨软化等。
Ca 邻-甲酚肽络合酮(CPC)法
有色络合物的生成，引起575nm吸光度的上升，上升程度与Ca浓度成正比(终点法)，长征公司采用此法。
甲基麝香草酚兰(MTB)法
有色络合物的生成，引起612nm吸光度的上升，上升程度与Ca浓度成正比(终点法)，科华公司采用此法。 升高见于甲状旁腺功能亢进、肿瘤骨转移、VitD过多；降低见于甲状旁腺功能减退、佝偻病、肾病等。
Mg
有色络合物的生成，引起582nm吸光度的上升，上升程度与Mg浓度成正比(终点法)。 升高见于尿毒症；降低见于吸收障碍、糖尿病性昏迷、急慢性酒精中毒、慢性肾病等。
Cl
红色络合物的生成，引起480nm吸光度的上升，上升程度与Cl浓度成正比(终点法)。 升高见于柯兴综合症、酸中毒、尿毒症等；降低见于阿狄森氏病、碱中毒、腹泻、尿崩等。
ApoA1/ apoB
抗原抗体复合物的形成，导致340nm透射浊度的增加，增加的程度与apoA1/apoB的浓度成正比(终点法)。 ApoA1降低和apoB升高见于未控制的糖尿病、肾病综合症、肝功能低下；ApoA1和apoB均降低见于长期血液透析；ApoA1与 apoB的比值可预测心血管疾病危险性的预测，比值高，危险性低。
Lp(a)
抗原抗体复合物的形成，导致340nm透射浊度的增加，增加的程度与Lp(a)的浓度成正比(终点法)。 高浓度的Lp(a)是动脉粥样硬化的独立危险因子。
1.7. 生化分析仪测定方法及反应度的计算
各项目的计算方法决定于其所采用的测定方法和定标模式，临床生化检验测定方法总的来说可分为二大类：终点法和动力学法，其中动力学法又可分为零级动力学法和一级动力学法，下面分别介绍。
1.7.1. 终点法
1.7.1.1. 概述
指经过一段时间的反应，整个反应达到平衡，所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加（或降低），吸光度的增加（或降低）程度与被测定物的浓度成正比。如下图：
如图所示：t1时刻加入试剂（体积为V）， t2时刻加入样本（体积为S），然后搅拌并反应，之后测量反应液的吸光度，在t3时刻反应达到终点； t2-t3为测定时间。
1.7.1.2. 反应度的计算
结果的计算包括三部分：反应度R（Response）的计算、定标参数的计算和浓度（或活性）的计算。这里仅介绍R的计算，定标参数的计算和浓度（或活性）的计算在后面专门讨论。
a) 单试剂单波长法
反应度R= t3时刻吸光度—单试剂空白吸光度
b) 单试剂双波长法
基本上同“单试剂—单波长—终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1-Aλ2。
c) 双试剂单波长法
t1时刻加入第一试剂（体积为V1），t2时刻加入样本（体积为S），之后搅拌，t3时刻加入第二试剂（体积为V2）并立即搅拌，t4时刻反应达到终点。t3-t2为孵育时间,t4-t3为测定时间。
R=t4时刻吸光度—双试剂空白吸光度；（反应起始时间设置为0）
R=t4时刻吸光度—双试剂空白吸光度—t3前一时刻的吸光度×体积校正因素；（反应起始时间设置为<0）
d) 双试剂双波长法
基本上同“单试剂—单波长—终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1-Aλ2。
1.7.2. 零级动力学法
1.7.2.1. 概述
指反应速度与反应物（底物）浓度无关。因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度（△A/min）与被测物（催化剂）的活性或浓度成正比。零级动力学法即通常所说的动力学法，也被称为连续监测法；主要用于酶活性的测定。
实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再与酶活性成正比（参见米氏方程），因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定，见下图中的t3-tn：
t1时刻加入试剂（体积为V），t2时刻加入样本（体积为S），t3时刻反应稳定，tn时刻停止对反应进行监测；t3到tn之间的时间内，吸光度匀速变化，变化的速率和反应物的浓度成线性关系。t2-t3为延迟时间，t3-tn为测定时间。
1.7.2.2. 反应度的计算
a) 单波长
其中：
n＝t3到tn间的数据个数
Ti＝时间
Ai=某一时间的吸光度
b) 双波长
基本同单波长，只是某一时间的吸光度等于主波长吸光度—次波长吸光度
1.7.3. 一级动力学法
1.7.3.1. 概述
一级动力学法是指在被测物参与反应的条件下，在一定的反应时间内，反应速度与反应物浓度的一次方成正比，由于反应物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加（或降低）速度越来越小，由于这类反应达到平衡的时间很长，必需在特定时间段内进行监测，该段时间内吸光度的增加（或）降低与被测定物的浓度成正比，见下图。一级动力学法又被称为初速率法、固定时间法、二点动力学法等。
如图所示：t1时刻加入试剂（体积为V），之后测量试剂空白的吸光度，t2时刻加入样本（体积为S），t3时刻反应稳定，t4时刻停止对反应进行监测；t2-t3为延迟时间，t3-t4为测定时间。
1.7.3.2. 反应度的计算
a) 单波长
反应度R=（t4时刻吸光度—t3时刻吸光度）/（t4—t3）
b) 双波长
基本同单波长，只是某一时间的吸光度等于主波长吸光度—次波长吸光度
1.8. 定标参数和浓度的计算
1.8.1. 定标的意义
定标就是要找出一个参考点，就是一个K值（或 F 值）。它是由仪器与试剂状态确定下来的。当我们测定一个标本时，无论您是用手工的方法或全自动生化分析仪，测出来的值只是一个吸光度，这个吸光度对我们没有什么意义，我们要把这个吸光度转换成一个浓度或是酶的活性。那就要乘上一个 K 值，计算并打印出来的结果对我们就有意义了。 K 值就是我们通过定标找出来的。一般上最低要求是有试剂空白与标准品。经过仪器测定出两个吸光度，则：
标准液的浓度我们是知道的，这两个吸光度可以由仪器测出，这样就得出一个 K 值。之后无论什么样的标本，我们只要测出一个吸光度，用吸光度乘以这个K值，就可以得到标本的浓度了。
因此， K 值具有非常决定性的意义，可以决定测量标本的准确性。
1.8.2. 定标参数的计算
定标方法分为两大类，即线性定标和非线性定标，其中线性定标又包括单点线性定标（又称因数法）、两点线性定标（又称线性法）和多点（大于3点）线性定标（又称线性回归法），主要适用于比色法测定的项目；非线性定标主要包括Logistic-Log 4P、Logistic-Log 5P、Exponential5P、Polynomial5P、Parabola和 Spline，主要适用于比浊法测定的项目，下面分别予以介绍：
1.8.2.1. 几点说明
a) 所有比色法的项目都是是线性定标，比浊法的项目都是非线性定标；
b) 后面的定标公式中：R表示反应度，C表示浓度（活性），K、R0、a、b、c、d表示定标参数。
c) 标准液：指浓度已经准确测知的溶液。
1.8.2.2. 线性定标
a) 单点线性定标
定标公式：R=KC，只有1个定标参数K，K=
定标曲线如下图：
只需提供1个标准品。大多数酶学项目可以不定标而直接输入因数(输入值F=1/K)。
b) 两点线性定标
定标公式：R=KC+b，有2个定标参数，K和b，
其中 ， ；
要求提供2个标准品，C1、C2为标准品1和2的浓度，R1、R2为标准品1和2的反应度。
定标曲线如下图：
c) 多点线性定标
定标公式：R=KC+b，有2个定标参数，K和b，其中：
要求提供n（n≥3）个标准品，Ci为标准品i的浓度，Ri为标准品i的反应度。
1.8.2.3. 非线性定标
a) Logistic-Log 4P
定标公式： ，有4个参数，即R0、K、a和b。
要求提供至少4个标准品，其中第1个标准品的浓度（活性）为零，其对应的R就等于R0，用最速下降法+拟牛顿法求解。适用于随着浓度增加，其反应度增加越来越小的定标曲线，如图：
b) Logistic-Log 5P
定标公式： ，有5个参数，即R0、K、a、b和c。 要求提供至少5个标准品，其中第1个标准品的浓度(活性)为零，其对应的R就等于R0，用最速下降法+拟牛顿法求解，适用范围同Logistic-Log 4P，只是曲线拟合程度更高。
c) Exponential5P
定标公式： ，有5个参数，即R0、K、a、b和c。 要求提供至少5个标准品，其中第1个标准品的浓度(活性)为零，其对应的R就等于R0，用最速下降法+拟牛顿法求解。适用于浓度增加到一定程度后，其反应度增加越来越大的定标曲线，如图：
d) Polynomial5P
定标公式： ，有5个参数，即R0、a、b、c和d。要求提供至少5个标准品，其中第1个标准品的浓度(活性)为零，其对应的R就等于R0，用最速下降法+拟牛顿法求解。
e) Parabola
定标公式：R=aC2+bC+c，有3个参数，即a、b和c。 要求提供至少3个标准品，解3元线性方程组，用全选主元高斯消去法求解。
f) Spline
定标公式：C-Ci=R0i+ai(C-Ci)+bi(C-Ci)2+ci(C-Ci)3-R有4i个参数，即R0i、ai、bi和ci。 要求提供2-6个标准品，用最速下降法+拟牛顿法求解。由于是分段拟和，其拟和程度在所有定标类型中最高。
1.8.3. 浓度（活性）的计算
浓度(或活性)C的计算根椐选用的不同定标类型而计算公式不同，下面一一列举：
1.8.3.1. 线性定标
a) 单点线性定标
，K为定标参数；或C=R×F，F为输入的因数。
b) 两点线性定标
，K和b为定标参数。
c) 多点线性定标
，K和b为定标参数。
1.8.3.2. 非线性定标（略）
1.8.3.3. 其他相关计算
a) 平衡点判断，仅适用于终点法
取设定的反应终点附近的连续4个周期吸光度值Ai，从i=0查起，若有连续|Ai-Ai+1|、|Ai+1-Ai+2|和|Ai+2-Ai+3|<δ(δ暂取0.03，依据重复性指标给出),则认为找到平衡点，否则在结果上标明“未找到平衡点”。
b) 线性限判断，仅适用于动力学法
测定点大于9个：线性限=(前6个点吸光度的变化率－后6个点的吸光度变化率)/所有点的吸光度变化率
4≤测定点≤8：线性限=(前3个点吸光度的变化率－后3个点的吸光度变化率)/所有点的吸光度变化率
下列情况不计算线性限：测定点数≤3；吸光度变化率小于0.006/分或吸光度变化率的差值小于0.006/分；计算出的线性限与设定值比较，若大于设定的线性限，则在结果上标明“超过线性限”。
c) 底物耗尽判断，仅适用于动力学法
仅对动力学法和固定时间法有效，一些高浓度（活性）样品使底物耗尽，使反应不再为0级(动力学法)或1级(固定时间法)反应，为能正确反映测定结果，需设置底物耗尽限(某一特定吸光度)，该吸光度限应正好是反应曲线中线性区与非线性区(动力学法)或1级反应区与多级反应区(固定时间法)的临界点，是在反应时间内反应没有发生底物耗尽时所能达到的最小(反应曲线向下)或最大(反应曲线向上)的吸光度值。一旦出现底物耗尽，系统给予相应标记，并自动稀释重测和提示用户手工稀释后再测定。
d) 抗原过剩检查，仅适用于比浊法
仅适用于通过光的透射测定的终点法项目，在抗原抗体的反应中，生成的不溶性抗原抗体复合物与抗原抗体的比例密切相关，在适当比例时生成的不溶性抗原抗体复合物量最大，此时透过的光最少，相当于吸光度最大；大于和小于这个比例时，生成的不溶性抗原抗体复合物量都会减少，透过的光增加，吸光度减小。在这种情况下，浓度相差很大的两份样本（抗原），生成的不溶性抗原抗体复合物量可以相等，如果不进行抗原过剩检查，会得到相同的测定结果。 | 
