[原创] 试剂空白与水点相关

郑振寰发表于 2016-5-23 19:56

在生化分析仪中，试剂空白的概念是在一个项目中，按照该项目的设置参数，用纯水做样品，用设置的试剂量做试剂进行的反应结果。这种反应只有试剂参与，纯水很少，稀释试剂的影响不大，甚至可以忽略。
试剂空白的用途一般都用在校准上，所以要想做试剂空白基本上都在校准界面下选择。所以，这里的试剂空白又叫水点，用校准品做校准的反应叫校准点，如果是多点校准那么校准品就有多份，就会有多个校准点。但校准的时候常常采用一个零浓度点，也就是用水当样品进行分析，得出的结果就是零浓度点，这就是水点俗称的来历。
不过也有特例，就是AU（奥林巴斯机型，现在叫贝克曼库尔特AU系列）。在AU机型中，试剂空白的概念有两个，一个是上面说的常见的水点，用在校准参数设置中，另一个是试剂调零，也属于校准范畴，所以在AU中试剂空白调零也在校准界面中。在选择一个项目校准的时候，可以选择单纯的试剂调零的试剂空白作为校准修正，也可以选择包括试剂调零的试剂空白和多个浓度点的全点校准。
在生化仪上，反应杯清洗过后，注入纯水进行空白比色，得到的结果是杯空白或者叫水空白，这个结果用来进行水调零。比如：一点终点法的ALB项目，使用1号反应杯测试，得到的样品吸光度是0.856，而这个1号反应杯的水空白/杯空白的相同波长的吸光度值是0.356，那么真正样品反应的吸光度值应该为0.856-0.356=0.5，这才是用于浓度计算的吸光度值。
所以杯空白/水空白在任何机型上都一样，都是单纯用水进行空白比色，仪器数据库记录每一个杯子每一个波长的吸光度值，无论后面的测试用什么波长都会找到对应的水空白/杯空白数据，计算浓度前先减掉水空白/杯空白数据。
那么试剂调零的试剂空白呢？跟水点的测试方法一样，按照该项目的设置参数，用纯水做样品，用设置的试剂量做试剂进行的反应结果。仪器数据库记录的是参数设置的波长（包括主副波长）每一个读点的吸光度值，也就是说AU的机型有28个读点，那么这个项目的试剂空白就记录两个波长28个读点的吸光度值，一共56个数据。这种试剂调零的试剂空白是用于以后该项目的反应计算的，还是以刚才ALB的例子，使用1号反应杯测试，得到的样品吸光度是0.856，而这个1号反应杯的水空白/杯空白的相同波长的吸光度值是0.356，而试剂调零的试剂空白跟杯子关系不大，是随机的，当初做试剂调零的试剂空白时可能采用的是76号反应杯，得到的数值是0.456。那么试剂空白的反应度就是0.456-0.356=0.1，但实际上，某些项目的试剂空白甚至会低于水空白，二者相减会产生负值。所以在浓度计算的时候，如果选择了试剂调零的试剂空白，用于浓度计算的吸光度值就是0.856-0.456=0.4，并不需要去减水空白。
这是AU系列的一个特例，别的机型没有。所以它的试剂空白其实是试剂调零，虽然也是RB/Reagent Blank。
正是由于AU系列的特殊性，所以它的试剂调零的试剂空白需要在校准前用特殊的蓝色架子单独测试，只走一个架子一个位置，这个位置只放纯水。
而在AU校准中，也可以用水点，也就是零浓度点（别的机型中也叫试剂空白），虽然与试剂调零的试剂空白操作读数一样，但在程序里是两回事，所以在校准用的黄色架子里，还是要有一个放水的样品杯。
也正是因为AU系列的两个所谓的试剂空白，所以引发了很多歧义或者误解。最常见的是校准时，选择了AA两点线性校准或4AB以上的多点校准，以为蓝架子已经做了试剂空白，就不再设置水点/零浓度点，这样校准会失败甚至根本不会让你保存校准设置。
在AU中，不是所有的项目都需要进行试剂空白调零，这跟参数设置时的反应方法有关。END/RATE/FIXED这三种方法必须进行试剂调零的试剂空白检测，得到的样品结果先减去试剂调零的试剂空白再计算。而END1/RATE1/FIXED1这三种方法不需要进行试剂调零的试剂空白，只减去相应的水空白/杯空白即可。
所以，在这里我要强调的是，不同型号的生化仪，特别是不同厂家的生化仪在参数设置和系统内置的判读流程上是不同的，不能用一个厂家的机型去套用另一个厂家机型。必须有针对性，这一点切记。
在所有机型的校准中：
水点=零浓度点（Blank），也就是用纯水做样品进行分析得到的浓度为零的吸光度值。在大部分机型中，也叫空白Blank，也有机型直接把水点缩写成RB，那么自然会被翻译成试剂空白，虽然这么翻译没有问题，但翻译成校准空白点或者水点更好，减少误读或歧义。
杯空白=水空白（Water Blank/Cell Blank），也就是反应杯用纯水进行空白比色得到的各个反应杯各个波长的吸光度值，用于反应吸光度计算时的基准数据，也就是水调零。
AU中的试剂空白其实是试剂调零用的，跟其它机型的水点不一样，是用水做样品，用参数设置的试剂量进行的测试，保存该项目选择的两个波长所有读点的吸光度数值，用来进行反应吸光度计算的基准数据。所以，这才是真正的试剂空白，RB/Reagent Blank。