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[分享] 贝克曼原厂试剂反应曲线

 火... [复制链接]
郑振寰 发表于 2014-11-8 20:55 | 显示全部楼层 |阅读模式
根据贝克曼原厂资料整理。
分为五个部分,DXC的CC部分,DXC的MC杯模块部分,DXC的ISE部分,AU系列,和AU系列漫盘指示曲线。
DXC-CC
DXC机型是双样品针和双试剂针,MC和ISE单独有自己的MC样品针,CC有单独的CC样品针。CC的试剂针分为A、B针,试剂筒为三腔结构。可以进行三次或三次以内的试剂加注。
第一加注在-180秒之前,样品在0秒加注,可以加注三腔试剂中全部或其中一、两个。样本加入后最长可以反应738秒。
第二加注在-180秒,或第9-738秒之间,可以加注三腔试剂中的一个。
第三加注在-172秒,或第9-738秒之间,可以加注三腔试剂中的一个。
DXC的试剂筒并非常见的双试剂R1R2的概念,常见的R1是消除干扰物,R2是启动反应物。而DXC的三腔试剂可能都是启动反应物,或者其中的两种是消除干扰物,一种启动反应物。消除干扰物提前在第一或第一、二加注是注入反应杯混合,加入样本后等待第三加注启动反应物,或者直接反应,也就是常规理解的单试剂。只不过DXC的单试剂是多腔试剂提前混合。
在DXC的反应方法中,只有End和Rate两种方法,每种方法又有五个选择,End1-5,End1-5,分别是选择是否扣除空白和扣除那一段儿的空白。
观看后面的反应曲线图之前,有必要复习一下这张图:





常规Alkaline Phosphatase  ALP 碱性磷酸酶
Rate 1 (increasing, non- triggered)(increasing表示上升反应, non-triggered表示无触发,加入样品后直接启动反应,也就是常规的单试剂用法)
Primary wavelength: 410 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL ORDAC表示自动重测)







曲线上用到了两种试剂,A腔和C腔,A228ulC22ul提前混合后加入反应杯,大概在-280秒左右的时间加入,样品5ul0秒加入,然后立即开始反应。空白读点,也就是试剂空白黄色线条区域在0秒之前,初始读点在0秒之后的2-5点,也就是16-40秒之间,绿色线条区域。速率主读点窗口在100秒之后,300秒之前,红色线条区域。
很明显可以看到AC混合加入后有个很长时间的反应过程,说明这两种试剂混合后还会有反应,等待稳定后再加入样品。这就是贝克曼试剂的不同常规双试剂之处。
DXC系列无法看到校准曲线,所以只能打印出来校准报告。
在终点法和一级速率法中,可以使用单点或双点校准,所有的校准都重复四次,去掉最大最小值,取中间的两个值进行斜率和截距的计算。这个很好理解,y=AX+B,二元一次方程,需要两个已知值解方程。
在其它方法中,所有校准只重复两次,并不抛弃任何一点,全部用于斜率和截距的计算。而在六点校准中,只做一次。
这个ALP的校准报告就是后者,采用两点校准,两个浓度值的校准品。Cuve表示校准时使用的反应杯号码,SETPts表示校准品靶值,Blank表示空白值,也就四空白读点区的吸光度值;Reaction是反应读点区的吸光度值,Recovery是计算后的浓度。
很明显的看到两个点的校准品各做了2次,前后两次的浓度和吸光度值进行重复性验证,超过范围就会报错,也就是常见的Back –to-back 背靠背错误。转换出来的浓度值不能超过最大最小的限制,否则会报Rangs范围错误,如果选择的校准曲线公式与测定出来的数值不拟合,会报计算错误。
这个ALP的图是两点线性校准,重复两次的结果都在范围内,所以计算出Cal Factor斜率和OFFSET截距。校准是成功的。

Alanine Aminotransferase  ALT 丙氨酸氨基转移酶
Rate 1 (decreasing, non- triggered) decreasing表示下降反应
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL






Alanine Aminotransferase  ALT-IFCC丙氨酸氨基转移酶
Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL (IFCC 表示国际临床化学和实验室医学联盟推荐方法)




这就是一级速率法的两点校准报告,两点全部重复四次,每点去掉最大最小值,取中间两个值计算,选中的两个值有Recov值显示,去掉的这一项就是空白。
Aspartate Aminotransferase  AST天门冬氨酸氨基转移酶
Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength:  340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL




A/C 242ul+B8ul+S23ul,这是一个三腔单试剂的组合。


Aspartate Aminotransferase  AST-IFCC天门冬氨酸氨基转移酶
Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL









Creatine Kinase CK肌酸激酶
Rate 1 (increasing, non- triggered)
mary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL






Creatine Kinase CK-IFcc肌酸激酶
Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL









Gamma-Glutamyl Transferase  GGT谷氨酰转肽酶
Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 410 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL









Lactate Dehydrogenase  LD乳酸脱氢酶
Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL




LD-P-IFcc
Rate1 (decreasing, non- triggered) Primary wavelength: 340 nm ORDAC Sample Volume:3 uL







这是两种不同方法的LD曲线,造成反应方向不同,而且提前混入的两种试剂的反应时间和幅度也不同。


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 楼主| 郑振寰 发表于 2014-11-8 20:55 | 显示全部楼层
Lipase  LIPA 脂肪酶
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL

这是常规双试剂的用法,B200ul提前加入,样品S 4ul在0秒加入,混合孵育200秒后加入C70ul,启动反应。
reagent triggered 表示用试剂触发反应,也就是样品加入后并不是反应的开始,需要再加一种试剂启动,这就是常说的双试剂R2加入后的启动反应。
这样空白读点区就应该是试剂和样品空白,也就是常见的R1+S的空白,所以在R2加入之前的区域,这里是200秒之前的黄色区域。初始反应区域是R2加入之后的1-5点之内绿色区域,红色区域才是反应读点。

Lipase- Random Access  LIP
Rate 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL



这个LIP有个特殊性,就是先用A腔的330ul清洗反应杯,提前加入,冲洗过后,再加入B和C的试剂混合孵育长达300秒后再加入样品。可以看出试剂加入后也是呈速率上升反应趋势,所以采用的是速率2法,反应速率减去空白速率,也就是红色区域减去黄色区域。

Cholesterol  CHOL胆固醇
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL



胆固醇也是个特例,虽然用终点法2,但反应并没有达到终点。

Direct HDL Cholesterol HDLD 高密度脂蛋白胆固醇
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm



高密也是个特例,选择的是终点法2,也就是终点反应减去空白反应。由于DXC没有固定点法和两点法选择,所以只能用终点法来替代固定点或两点法。
A先加入,0秒加入样品,200秒之前加入B,初始读点在B加入之后,空白读点并不是在B加入之前,而是在B加入之后的200秒以后,主读点在反应最后的终点区。这就是常说的两点终点法都在R2之后。这也是无奈之举,首先DXC除了终点和速率法没有其它方法,其次是B加入后明显的下降弯钩,将空白取在弯钩底部比取在B之前,更能准确的反应出反应变化的程度。

Direct LDL Cholesterol  LDLD 低密度脂蛋白胆固醇
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm




典型的双试剂两点终点法

Total Triglyceride  TG 甘油三酯
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm




Total Triglyceride Blanked  TG-B 甘油三酯去甘油空白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 520 nm




Albumin  ALB白蛋白
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 600 nm





Blood Urea Nitrogen BUN /UREA血尿素氮

Rate 1 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Urine Sample Type:
On-board dilution 20 uL Sample + 180 uL DIL1 (3 uL diluted sample to reaction cuvette)




Creatinine  CR-S 肌酐
Rate 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm



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 楼主| 郑振寰 发表于 2014-11-8 20:55 | 显示全部楼层

Direct Bilirubin  DBIL 直接胆红素
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm




Glucose  GLU葡萄糖

Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Iron FE铁
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm




Magnesium  MG镁

Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm
Urine Sample Type:
On-board dilution 20 uL Sample + 180 uL DIL1 (3 uL diluted sample to reaction cuvette)




Micro-Total Protein  M-TP (CSF) 脑脊液微量总蛋白
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 600 nm




Micro-Total Protein  M-TP (Urine)尿液微量总蛋白

Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 600 nm



单试剂的mTP,B加入后随着温度孵育,逐渐趋于稳定。然后再加入样品启动反应。




Phosphorus  PHS
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm






Total Bilirubin  TBIL 总胆红素


Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm



DXC的胆红素校准很奇怪,高点在前零点在后。总胆的心电图曲线是因为吸光度变化太小的缘故。

Total Protein  TP总蛋白
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 560 nm




Uric Acid  URIC/UA 尿酸
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 520 nm
ORDAC Sample Volume: 6 uL
Urine Sample Type:
On-board dilution 20 uL Sample + 180 uL DIL1 (12 uL diluted sample to reaction cuvette)



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毒品监测
Alcohol  ETOH酒精
Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Amphetamines  AMPH 安非他命
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Barbiturates  BARB 巴比妥

Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm



三点校准。

Benzodiazepine  BNZG 苯二氮
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Cocaine Metabolite  COCM 可卡因代谢物
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Methadone  METD 美沙酮
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Methaqualone  METQ 安眠酮
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Opiate  OP 鸦片300 ng/mL

Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Opiate  OP2 鸦片 2000 ng/mL
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Phencyclidine  PCP苯环己哌啶
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




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Propoxyphene  PROX丙氧芬
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Cannabinoids THC2大麻 20 ng/mL
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Cannabinoids  THC5大麻 50 ng/mL
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




药物监测
Acetaminophen  ACTM 醋氨酚

Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm



三种试剂全部用上,形成双试剂速率反应,六点校准。

Carbamazepine  CAR甲酰胺苯卓
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Digoxin  DIGN地高辛
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm




Gentamicin  GEN 庆大霉素
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 380 nm
Note: blank window and initial window are the same.




Phenobarbital  PHE 迦地那
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Phenytoin  PHY苯妥英
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Theophylline  THE二氧二甲基嘌呤
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm



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Tobramycin  TOB 托霉素
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm

  


Valproic Acid  VPA丙戊酸
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 600 nm




Vancomycin  VANC 万古霉素
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 2 uL




特定蛋白
Complement 3 (C3)补体C3

Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Lot-specific Parameter Card




Complement 4 (C4) 补体C4
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340  nm
Lot-specific Parameter Card




Haptoglobin (HPT) 结合珠蛋白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Lot-specific Parameter Card




Immunoglobulin A Ig-A免疫球蛋白A
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 10 uL for reaction
On-board dilution (ORDAC Range): 3 uL Sample + 297 uL DIL1; 4 uL for reaction
(URDAC Range): 5 uL undiluted sample for reaction




Immunoglobulin G Ig-G免疫球蛋白G
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 4 uL for reaction
On-board dilution (ORDAC Range): 3 uL Sample + 297 uL DIL1; 4 uL for reaction




Immunoglobulin M Ig-M免疫球蛋白M
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 2 rxn. cuvettes used:
24 uL for reaction and 3 uL for Antigen Excess reaction
On-board dilution (ORDAC Range): 3 uL Sample + 297 uL DIL1; 1 rxn. cuvette used:
3 uL for reaction




Transferrin TRFN转铁球蛋白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 6 uL for reaction



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Apolipoprotein A APOA载脂蛋白A
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 6 uL for reaction




Apolipoprotein B APOB载脂蛋白B
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
Diluted Sample:
On-board dilution (Analytical Range): 10 uL Sample + 190 uL DIL1; 20 uL for reaction




Anti-Streptolysin O ( ASO-)抗链球菌霉素O
Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL



C-Reactive Protein CRP C反应蛋白

Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 4 uL



常规双试剂的CRP反应,但并非我们常用的样条校准,而是线性校准。

C-RP

Rate 1 (increasing)
Primary wavelength: 600 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL



Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 380 nm
ORDAC Sample Volume: 4 uL




特殊项目
Ammonia AMM阿摩尼亚

Endpoint 2 (decreasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Cholinesterase CHE 胆碱酯酶
Rate 1 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 410 nm


Creatine Kinase MB Isoenzyme CKMB 肌酸激酶同工酶

Rate 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm
ORDAC Sample Volume: 12 uL


Hemoglobin A1c (Hb &A1c) A1c2 (Hb2 &A1c2) A1c3 (Hb3 &A1c3)糖化血红蛋白
Hb
Endpoint 2 (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 560 nm

A1c
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm










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Lactate (LACT)乳酸
  


Lithium (Li) 锂

(decreasing, non- triggered)
Primary wavelength:
Samples and Reagent Volume :
10 uL Neat + 280 uL DIL1 from compartment A
5 uL diluted samples + 200 uL of reagent




Microalbumin MA 微量白蛋白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 380 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL




Prealbumin  PAB 前蛋白
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 340 nm




Pancreatic Amylase(PAM)胰淀粉酶

Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 410 nm
ORDAC Sample Volume: 3 uL


Salicylate (SALY)水杨酸

Endpoint 2 (decreasing, non- triggered)
Primary wavelength: 340 nm




甲状腺
Thyroxine (T4)甲状腺

Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 410 nm




Thyroid Uptake (TU) 甲状腺摄取率
Rate 1 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 410 nm




High Sensitivity C-Reactive Protein (CRPH)高敏C反应蛋白
Peak Rate (increasing, non- triggered)
Primary wavelength: 940 nm (NIPIA/LPIA Detector)
Process 45 used:
Analytical Range: 10 uL Sample discarded + 10 uL Sample to reaction cuvette
ORDAC Range: 10 uL Sample discarded + 2 uL Sample to reaction cuvette




Direct LDL Cholesterol (LDLX)UDR用户自定义低密度脂蛋白胆固醇
Endpoint 2 (increasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 560 nm
Initial window for UDR is read 1 cycle (8 seconds) after last component (B) is added.


Iron Binding Capacity, Unbound(UIBC) UDR用户自定义铁结合力

Endpoint 2 (decreasing, reagent triggered)
Primary wavelength: 600 nm
Initial window for UDR is read 1 cycle (8 seconds) after last component (B) is added.


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DXC-MC
MC模块分为杯模块和ISE模块。
杯模块有最多六个,GLU、BUN是电极法,TP、ALB、Phos、CRE是光学法。
在杯模块中,系统检测一个样品的流程是40秒,在样品加入之前读取试剂空白,也就是参比读点,是黄色区域。样品加入之后读取反应读点,也就是红色区域。
样品反应结束之后,排空反应液,然后加入去离子水冲洗或直接接入新的试剂准备下一次检测。
搅拌存在整个过程,除了排空完毕加入去离子水或试剂的几秒钟停止外。
杯模块的校准是重复四次,去掉最大最小值进行计算。终点法的项目不显示Rate值,速率法的项目显示;delta ABS只在终点法的项目中显示;Init Read是初始读点,也就是空白读点。Final Read是最终读点。SET Point是校准靶值;
SET Point unit是校准单位;Replicates Used表示保留下来哪两个重复值作为计算依据。
保留下来的重复值首先验证重复性,也就是背靠背。然后进行范围检查,超出设定的范围都会报告校准失败。

Albumin (ALBm)白蛋白
Endpoint (5 point average)
     


终点法反应,读点区有五个读点的值平均。校准选择的是1、3两个保留重复值。

Urea Nitrogen (BUNm)尿素氮
Rate (7 point moving medium)
   


速率法反应,7个点的值平均。

Creatinine (CREm)肌酐
Rate (5 point average)

   

速率反应,反应液排空后连续两次去离子水冲洗后才灌注试剂。读点开始前搅拌关闭,两次水洗时搅拌开启。
Glucose (GLUCm)葡萄糖
   

  速率反应。

Phosphorus (PHOSm)磷
Rate (5 point moving average)
  

速率反应,反应读点前搅拌慢速运转,排空和水洗以及灌注试剂时高速运转。

Total Protein (TPm)总蛋白
Rate (least square linear regression)
  

速率法反应,

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DXC-ISE
Sodium (NA)钠

40 mL sample volume

ISE单元除CO2外,K、Na、Cl、Ca都是在17.8-18.7秒间读取样品数据(ADC),每0.1秒读取一个ADC,共读取十个,去掉最后一个ADC值,前面九个平均值就是样品的ADC值。
在34.8-35.7秒之间读取10个参比通道ADC值,去掉最高最低后平均得出参比值。
根据样品值和参比值和校准曲线进行最终样品结果的计算。

Potassium (K)钾
40 mL sample volume


Calcium (CALC)钙
40 mL sample volume


Chloride (CL)氯
40 mL sample volume


Carbon Dioxide (CO2)二氧化碳

40 mL sample volume

CO2采用的是速率法。所以参比读点和样品读点都是很大的范围,这样才能读取速率。


ISE没有内标液,所以校准要采用三个不同浓度的校准液,这是第一浓度校准报告。每个浓度的校准重复四次,去掉最大最小值,选择两个使用计算(Replicates Used),Smpl Reference是样品参比值,与设定的参比ADC值的差值,超过设定范围,会报告范围错误。Sample是样品反应几个读点的平均值;Smpl Deviation是几个读点的最大最小值的差值,这个差值不能超过设定值,否则会认为噪音干扰,但CO2没有此项。Referece是参比读点的ADC均值。Ref Deviation是参比读点的最大最小值差值,超过限制也会报噪音干扰。选择留下来的结果进行重复性比对,超过范围会报告背靠背错误。

这是第二浓度校准品重复四次的报告,只有第二、三浓度校准报告才会有Span跨距,也就是浓度1和浓度2之间的样品参比ADC均值的差,或者浓度2与浓度3之间的样品参比ADC均值的差。

这是第三浓度校准的四次重复性报告。


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 楼主| 郑振寰 发表于 2014-11-8 20:55 | 显示全部楼层
AU 曲线分析
AU的曲线与遗留机型大致相同,稍微的区别是8系列AU机型将R1分为R1-1和R1-2,类似变为三试剂。但实际上,加注顺序是这样的,R2-1先加入,然后加入R1-1,读取P0点,接着加入样品读取P1点,在P10点之后加入R2,读取P11点。这样的设计可能是为了迎合为DXC这样的机型设计的试剂使用,将R1的某些不宜长时间保存在一起的成分分开保存,使用前再加入。
以前很少见到官方试剂的反应监测图,所以在设计两点终点法时,我都会采用两组读点,也就是Measuring Point-1 和Measuring Point-2都用上,Measuring Point-1是主读点,我一般设为0-27;Measuring Point-2为空白读点,我一般设为0-10;后来是位厂家的工程师告诉我这么做其实就是10-27,没必要如此麻烦。想想也是,后来设置的时候,都只设置Measuring Point-1的10-27。但今年看到官方的反应监测后才知道,原来我的做法是对的,但也无法说出后来的做法有什么不对,毕竟通过公式推导后,结果是一样的。
AU的反应方法有三种:
End终点法,减去试剂空白;还有一个End1选项,不是减去试剂空白,而是减去水空白,就是光度计校准里得到的水空白值。
Rate速率法,减去试剂空白;还有一个Rate1选项,不是减去试剂空白,而是减去水空白,就是光度计校准里得到的水空白值。
Fixed固定点法,减去试剂空白;还有一个Fixed1选项,不是减去试剂空白,而是减去水空白,就是光度计校准里得到的水空白值。
这就是为什么有些反应监测里没有试剂空白参数的原因。相比较试剂空白来说,水空白更为稳定些,毕竟最少每周都要监测一次。

Alanine Aminotransferase (ALT) 丙氨酸转氨酶
P10和P11点由于加入R2启动反应时间,所以有些波动,迅速向上抬起。从P11到P27有稳定的向下反应直线。这是正常的反应曲线。 P11点之前的虚线是因为P10之前的所有溶液体积小于最低反应量,例如最低反应量是120ul,但在P11点之前就会计算这个量,如果R1+S+稀释液的量不足120UL,但后面的R2加入后够了的话,前面11个点的曲线就是虚线。
AU480/AU680/AU2700/AU5400/AU5800的副波长为660nm,AU400/AU600/AU640的副波长为380nm。
试剂稳定期30天,试剂空白稳定期7天。
对温度波动和细菌污染敏感。
同主波长项目:AST, CK, GLU, LDH, PHOS, BUN。
同R2分配灵敏度:AST, CK, TP, TRIG, UA。
同样温度敏感项目:所有酶、CREA,HDL-C。
同样细菌污染敏感项目:AST, ETOH, LIP。
出现“*”旗标,检查光源、光度计校准和反应杯溢流(漫盘)。


Albumin (ALB)白蛋白
单试剂,P11点无明显变化。该项目反应时间极短,注意P11点后的反转波动。
同样是单试剂项目:HDL-C, IRON, UCSFP。
同样微量样品进样的项目:AMY, CHOL, GLU, LIP, MG, TRIG, UCSFP, serum proteins。
同样R1分配灵敏度的项目: AMY, CALA, CO2, DBIL, TBIL,CHOL, MG, UIBC, UCSFP。
试剂稳定期90天,校准稳定期30天。


这里插一句,上面的图示AU系列自带打印机打印机的原始结果报告,估计遍这本书的人编写DXC习惯了,忘记了AU反应监测给出的信息相当多,足够分析问题了。每一张曲线都给出了这种原始结果报告。我把后面的相关内容都删掉了,反应监测就足够了。


Alkaline Phosphatase (ALP)碱性磷酸酶
试剂稳定期14天(AU5800只有7天)。试剂空白稳定期14天。
相同主波长项目: AMY, GGT。
相同温度波动敏感项目:所有酶、CREA,HDL-C。
更换一次试剂,将会导致质控值波动超过10%。
质控测试前,室温稳定1-2个小时。在仓试剂过长,会因二氧化碳影响试剂成分。出现“*”旗标,检查光源、光度计校准和反应杯溢流(漫盘)。


Amylase (AMY)淀粉酶
试剂稳定期30天,校准稳定期7天,单试剂。
相同主波长项目:ALP, GGT。
相同微量样品分配灵敏度项目:ALB, CHOL, GLU, LIP, MG, TRIG, UCSFP, serum proteins。
相同R1分配灵敏度项目:ALB, CALA, CO2, DBIL, TBIL,CHOL, MG, UIBC, UCSFP。
相同温度波动敏感项目:所有酶、CREA,HDL-C。
出现“*”旗标,检查光源、光度计校准和反应杯溢流(漫盘)


Aspartate Aminotransferase (AST) 天门冬氨酸氨基转移酶
AU480/AU680/AU2700/AU5400/AU5800的副波长为660nm,AU400/AU600/AU640的副波长为380nm。
试剂稳定期30天,试剂空白稳定期7天。
对温度波动和细菌污染敏感。
同主波长项目:ALT, CK, GLU, LDH, PHOS, BUN。
同R2分配灵敏度:ALT, CK, TP, TRIG, UA。
同样温度敏感项目:所有酶、CREA,HDL-C。
同样细菌污染敏感项目:ALT, ETOH, LIP。
出现“*”旗标,检查光源、光度计校准和反应杯溢流(漫盘)。


Bicarbonate (CO2)二氧化碳

试剂稳定期7天,校准稳定期1天,单试剂。
同主波长项目:C3, TRF。
同样试剂分配灵敏度项目:ALB, AMY, CALA, DBIL, TBIL,CHOL, MG, UIBC, UCSFP。
对水溶气体敏感,特别是水源处理不好含有大量碳酸钙成分会导致试剂空白的增加。试剂空白P1-P9点OD变化应<0.02,否则就要维护去离子水管道和单元,还有脱气单元。血清碳酸氢盐试剂在2-8℃下暴露,只能稳定几个小时。 在仓试剂吸收大气中的CO2会影响稳定性。
采用了Fixed固定点法,1-9读点。


Calcium Arsenazo (CALA)钙

试剂稳定期90天,校准稳定期30天,单试剂。
11点出现拐点波动,所有读点为P0和P10。
同主波长项目:TRIG, UA。
相同R1分配灵敏度项目:ALB, AMY, CO2, DBIL, TBIL,CHOL, MG, UIBC, UCSFP。
相同反应杯敏感项目:BUN,CRE,DBIL,MG,UIBC。
对水质敏感,试剂空白升高、结果漂移首先考虑维护去离子水管道和单元。采用EDTA络合滴定实验确认水质。


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 楼主| 郑振寰 发表于 2014-11-8 20:55 | 显示全部楼层
Calcium oCPC (CA)钙
试剂稳定期30天(AU5800只有21天),校准有效期1天。
同主波长项目:DBIL, TBIL。
对水质敏感,试剂空白升高、结果漂移首先考虑维护去离子水官道和单元。
在仓试剂吸收大气中的CO2,将会影响稳定性。


Cholesterol (CHOL)胆固醇
试剂稳定期90天,校准稳定期30天,单试剂。
同主波长项目: DBIL, LDL-C, LIP, TP。
相同样品分配灵敏度项目: ALB, AMY, GLU, LIP, MG, TRIG, UCSFP, serum proteins。
相同R1分配灵敏度项目: ALB, AMY, CALA, CO2, DBIL,TBIL, MG, UIBC, UCSFP。


Cholinesterase (CHE)胆碱酯酶
试剂稳定期30天。
相同主波长项目:ALP, AMY, GGT。
R1对光敏感,注意避光。


Creatinine (CRE)肌酐
试剂稳定期7天,校准稳定期1天,最少8小时间隔质控。
相同主波长项目:MG。
相同温度波动敏感项目:所有酶、HDL-C。
相同反应杯敏感项目:BUN, CALA, DBIL, MG, UIBC。
试剂在仓暴露,易吸收空气中CO2,影响稳定性。
R1试剂对光敏感,注意避光。
这个与DXC的读点方法类似,但没有采用End法,因为AU有FIXed固定点法,所以采用固定点法,读点13-24,都在R2之后。


Creatine Kinase (CK)肌酸激酶
试剂稳定期:30天,试剂空白稳定期30天。
相同主波长项目:ALT,AST,GLU,LDH,PHOS,BUN。
相同R2分配灵敏度项目:ALT,AST,TP,TRIG,UA。
相同温度波动敏感项目:CREA,HDL-C。
出现“*”旗标,检查光源、光度计校准和反应杯溢流(漫盘)。


Direct Bilirubin (DBIL)直接胆红素

试剂稳定期21天,校准稳定期7天。单试剂。
相同主波长项目:CA, TBIL。
相同R12分配灵敏度项目:ALB, AMY, CALA, CO2, CHOL,MG, TBIL, UIBC, UCSFP。
相同反应杯敏感项目:BUN,CRE,CALA,MG,UIBC。
试剂和样品需要避光。
这个项目原厂采用了样品空白通道方法,第一张图是样品的空白曲线,也就是样品与水按照试剂比例混合后读取的吸光度值曲线,第二张才是反应曲线,然后二者相减再进行浓度计算。这是单试剂采用的直胆检测方法。第三张图示双试剂的直胆曲线,一步完成。可以看出在原厂试剂里,直胆的反应速度很快,单试剂的读点是0-2,双试剂10-12,虽然远没有达到终点。



      

Gamma-Glutamyltransferase(GGT)谷氨酰转肽酶
试剂稳定期30天,校准稳定期30天。
相同主波长项目:ALP, AMY.
相同温度波动敏感项目:所有酶、ALP, AMY。
出现“*”旗标,检查光源、光度计校准和反应杯溢流(漫盘)。


Glucose (GLU)葡萄糖
试剂稳定期30天,校准稳定期30天。
相同主波长项目:ALT,AST,CK,LDH,PHOS,BUN。
相同样品分配灵敏度项目:ALB, AMY, CHOL, LIP, MG, TRIG, UCSFP, serum proteins。
  

HDL-Cholesterol (HDL-C)高密度脂蛋白胆固醇
试剂稳定期30天,校准稳定期7天。
相同主波长项目:ALB, IRON, UCSFP。
相同温度波动敏感项目:所有酶、CRE。
这就是两点终点法的例子,Measuring Point-1和2都用上了,分别是0-27和0-10,其实就是10-27。

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 楼主| 郑振寰 发表于 2014-11-8 20:55 | 显示全部楼层
Iron (IRON)铁
试剂稳定期60天,校准稳定期30天。
相同主波长项目:ALB, HDL-C, UCSFP。
对搅拌敏感,高值结果应检查搅拌破损或污染。
对水质敏感,较高的试剂空白出现应检查处理水处理系统和管道。
对CRE和TRIG项目有携带污染的可能,注意增加特殊清洗。


LDL-Cholesterol (LDL-C)低密度脂蛋白胆固醇
试剂稳定期30天,校准稳定期7天。
相同主波长项目:CHOL, DBIL, LIP, TP。
试剂需要避光。
注意校准点的设置。


Lactate Dehydrogenase (LDH)乳酸脱氢酶
试剂稳定期30天(AU5800只有14天),校准稳定期30天。
相同主波长项目:ALT,AST,CK,GLU,PHOS,BUN。
相同温度波动敏感项目:所有酶、CREA, HDL-C。
质控存储温度在-70℃时,影响结果。
出现“*”旗标,检查光源、光度计校准和反应杯溢流(漫盘)。


Lipase (LIP)脂肪酶
试剂稳定期21天,校准稳定期7天。
相同主波长项目:CHOL, DBIL, LDL-C, TP。
相同样品分配灵敏度项目:ALB, AMY, CHOL, GLU, MG, TRIG, UCSFP, serum proteins。
校准品是特种瓶,注意设置点和位置。
TRIG, HDL-C和LDL-C有携带污染的可能,注意增加特殊清洗。
双盘设备设置到不同的反应盘,单盘设备用CLN 100%取代针清洗剂,确认冲洗站清洗液有效。


Magnesium (MG)镁
试剂稳定期7天,校准有效期7天,试剂空白有效期当天。单试剂。
相同主波长项目:CRE。
相同样品分配灵敏度项目:ALB, AMY, CHOL, GLU, LIP, TRIG, UCSFP, serum proteins。
相同R1分配灵敏度项目:ALB, AMY, CALA, CHOL, CO2,DBIL, TBIL, UIBC, UCSFP。
相同反应杯敏感项目:BUN,CALA,CRE,DBIL,UIBC。
水质敏感,用滴定法测定水质借以判断,必要时维护水处理系统。


Phosphorous, Inorganic (PHOS)磷
试剂稳定期30天,校准稳定期30天。
相同主波长项目:ALT,AST,CK,GLU,LDH,BUN。
水质敏感,结果漂移应检查水处理系统。


Total Bilirubin (TBIL)总胆红素
试剂稳定期90天,校准有效期30天,单试剂。 也是采用样品空白通道法。
相同主波长项目:CA, DBIL。
相同R12分配灵敏度项目ALB, AMY, CALA, CO2, DBIL,CHOL, MG, UIBC, UCSFP。
试剂和样品需要避光。
  



Total Protein (TP)总蛋白
试剂稳定期30天(AU5800是21天)。
相同主波长项目:CHOL, DBIL, LDL-C, LIP。
相同R2分配灵敏度项目:ALT,AST,CK,TRIG,UA。


Triglyceride (TRIG)甘油三酯
试剂稳定期30天,校准稳定期30天。
相同主波长项目:CALA, UA。
相同样品分配灵敏度项目:ALB, AMY, CHOL, GLU, LIP, MG, UCSFP, serum proteins。
相同R2分配灵敏度项目:ALT,AST,CK,TP,UA。
相同的搅拌敏感项目:BUN,CRP Latex,RF Latex。
反应监测中在P11点见到不常见的波动或峰值。
对水质敏感,被甘油污染的水会导致试剂空白出现“Y”旗标,特别是维修过后。


Unsaturated Iron Binding Capacity (UIBC)不饱和铁结合力
试剂稳定期30天,校准稳定期14天。
相同主波长项目:DDIM。
相同R12分配灵敏度项目:ALB, AMY, CALA, CHOL, CO2,DBIL, TBIL, MG, UCSFP。
相同反应杯敏感项目:BUN,CALA,CRE,DBIL,MG。
R2a试剂可能对R2造成携带污染,注意搅拌系统的破损和清洗。并注意瓶间差造成的质控和结果不稳定。
相同搅拌敏感项目:IRON。

Urea Nitrogen (BUN)尿素氮
试剂稳定期30天(AU5800是14天),校准稳定期14天(AU5800是7天)。
相同主波长项目:ALT,AST,CK,GLU,LDH,PHOS。
相同反应杯敏感项目CRE,CALA,DBIL,MG,UIBC。表现在高吸光度区域测量变化值很小。
相同搅拌敏感项目:TRIG,CRP Latex,RF Latex。P11点出现异常波动或峰值,应检查搅拌棒高度和破损。
相同温度波动敏感项目:所有酶、CREA, HDL-C。
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Uric Acid (UA)尿酸
试剂稳定期30天,校准稳定期30天。
相同主波长项目: CALA, TRIG。
相同R2分配灵敏度项目:ALT,AST,CK,TP,TRIG。
水质敏感。结果不稳定,过高的试剂空白应维护水处理系统。


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 楼主| 郑振寰 发表于 2014-11-8 20:55 | 显示全部楼层

漫盘指示项目的曲线
漫盘影响所有的测试结果,但有如下项目最为敏感,所以成为漫盘指示项目,观察这些项目的曲线成为判断漫盘的一个依据,这些项目出现这样的曲线时,应注意漫盘现象的产生。
DBIL 直接胆红素、TBIL 总胆红素、CP 血浆铜蓝蛋白、CHOL 胆固醇、CREA 肌酐、CRP C反应蛋白、GLU 葡萄糖、
IRON 铁、MG 镁、PH 磷、TP 总蛋白、TG 甘油三酯、UA 尿酸。
漫盘的特征:
R1添加时的吸光度高,第一读点P0出现峰值,P1到P5逐渐回落;
R2添加时也会出现峰值,一般是P11、P12、P13,主副波长都会受到影响,反应曲线(主波长-副波长)可能会趋于正常。
AU640的Tbil 总胆红素,前图正常,后图漫盘,以下雷同。
  


AU2700/5400的CHOL 胆固醇

  


AU680/480的CRP C反应蛋白

  


AU2700/5400的GLU 葡萄糖
  



AU2700/5400的IRON 铁
  



AU680/480的TP 总蛋白
  



AU400的CRE 肌酐
  



AU2700/5400的CRE 肌酐



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qqjxf 发表于 2014-11-8 23:13 | 显示全部楼层
真是我们新手的福音啊
武帝弟 发表于 2014-11-9 09:59 | 显示全部楼层
郑总辛苦!感谢。
小虫 发表于 2014-11-9 10:08 | 显示全部楼层
太详细了  多谢老大
凯迪 发表于 2014-11-9 20:35 | 显示全部楼层
非常感谢
pdsh158 发表于 2014-11-10 08:03 | 显示全部楼层
老大,无法言表!谢谢您!真是让我们惭愧,差距呀1
havenomoney 发表于 2014-11-10 09:16 | 显示全部楼层
好资料,多谢楼主!
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