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[转发]JELLYFISH 1.3 使用手册

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郑振寰 发表于 2007-6-5 19:34 | 显示全部楼层 |阅读模式

软件简介:
一、打开软件
二、项目窗口
三、控制面板
四、限制性酶切面板
五、排序面板
六、Oligos面板
七、PCR面板
八、备注面板
九、Genbank面板
十、统计面板
十一、网络工具面板
十二、Internet 面板
十三、菜单中的一些重要工具

软件简介:
JellyFish1.3是专为分子生物学研究提供的一个功能强大的软件包。其图形界面比以往任何时候都能更迅速、有效地执行基因分析、DNA翻译、序列排序,限制性消化产物显示、通过简单的鼠标点击向BLAST或其它序列分析网站提交待分析的序列。这个软件一个最大的特点是具有交互性-它可以根据用户反馈了解软件使用情况,并且适当增加一些新的功能以使JellyFish成为最有价值的和最有效的研究工具。下面就此软件的一些功能作简略介绍:
一、打开软件
JellyFish第一次打开时需登录陆JellyFish网址(www.biowire.com)进行用户注册,注册后JellyFish屏幕如图所示。

屏幕的左侧为该软件的项目窗口,屏幕右手端为控制面板窗口。 JellyFish的功能就围绕着在主窗口中选择文件(通常为一序列),然后使用控制面板对该文件进行分析。
有两种方法可将一序列添加到项目窗口中:
1)如果想从Genbank中导入一序列,在屏幕左侧顶端的“file”菜单中选择“Import from Genbank”命令。 输入搜索的条目并从下拉菜单中选择范围, 单击“Search”。 从出现的结果中选择一个或多个序列单击“Fetch”收取。你的选择被自动地加入到项目窗口中。如果仅选择一个序列,它以单个文件形式出现在项目窗口中,如果选择多个序列,它们以文件组形式在所选术语的文件夹中出现。
2)如果你已将序列存储在计算机中,从文件菜单中选择“Open”,在对话窗中选择你想要打开的文件,序列自动出现在项目窗口中。当你关闭JellyFish时,你已建立的所有文件自动地存储在项目窗口中。它们将在下一次打开JellyFish时出现在项目窗口中。
二、项目窗口
项目窗口用于对序列进行组织排列。 当你在项目窗口中选择某一序列时,序列就在控制面板中被激活。
序列文件
每一序列都有其自己的文件。所有与序列有关的寡核苷酸和网络检索工具被储存在创建一新文件:对于一个新的DNA序列,单击 选择“New DNA Sequence”按钮。对于其它形式的文件,鼠标点击“New DNA Sequence”按钮右侧下拉菜单 ,选择诸如新DNA、RNA或蛋白质序列,或新项目和文件夹。你也能使用这一菜单从Genbank输入序列或打开已存储的文件。
复制文件:鼠标右键点击文件名,从菜单中选择“Duplicate ”。也可选定项目窗口的文件点击 复制按钮。
文件重新命名:单击选定的文件,等待数秒后再次点击选定的文件,输入新的文件名后点击“ENTER”回车键即可完成文件重新命名。也可用鼠标右键点击文件,从下拉菜单中选择“Duplicate ”。
导出文件:鼠标右键点击文件,从下拉菜单中选择“Export”,在出现的对话窗中选择文件导出的具体位置。
删除文件:鼠标右键点击文件,从下拉菜单中选择“Delete”。也可选定项目窗口的文件,点击菜单栏中 的“删除文件”按钮。

三、控制面板
控制面板介绍
每一个面板代表着在项目窗口中选择的序列所执行的不同的分析任务。这些面板既是相对独立的,又相互协同。在一面板中显示的任务,当你转入其它面板工作时,这一任务被保持在原来的面板中。
操纵面板
这一面板允许你图表化探索、操纵选定的序列。从项目窗口中选择序列,在操纵面板中,序列在图型描述窗口的顶端以图表形式表示出来,而文字出现在底部的序列窗口。
绿色条代表整个序列,紫色滑条可在序列内由鼠标拖动自由移动,在紫色滑条内的序列部分与序列窗口中的序列是相同的。

1.注释
在绿色条块下面的蓝色条代表着选择序列的注释。 单击注释,相应的序列则在下面的序列窗口中被突出显示出来。 如下图中点击代表启动子的蓝色条,序列窗口中就显示出相应地序列。

2. 添加注释
有四种方法可将新的注释添加到你所工作的序列中:
1)在序列窗口中选定欲添加注释的代码,然后单击注释窗口之上的 “增加注释按钮” 添加注释;
2)单击“增加注释按钮”,把注释添加到相应的对话窗中;
3)在序列窗口中选定代码,然后鼠标右键点击选定代码,从下拉菜单中选择“增加注释”命令;
4)在序列窗口中选定代码,然后在菜单栏“ACTIONS” 中选择增加注释命令。
3.BLAST,Save as,编辑、删除和注释
如果用鼠标右键单击注释,你将在下拉菜单中选择BLAST,Save as,编辑、删除和注释。
a)BLAST:从下拉菜单中选择“BLAST”命令。在随后出现的安全警告栏中你被告知如果序列数据发出站点,这就有可能造成此程序泄密。但一般我们忽略此警告,单击确定按纽,序列数据将被发出到BLSAT站点,而此时注释面板转到“NCBI Blast Result”面板中,在其中你所发出序列的检索结果按顺序上下排列。
单击“Format results”按钮。 因特网面板将显示从发出信息到接收所需要的时间,一旦得到结果就显示出来。注:如果序列是DNA,BLAST 使用blastn格式,而序列是蛋白质,blastp则被使用。
b)Save as:从下拉菜单中选择“Save as”命令。对话窗询问注释另起的名字。 单击“OK。”新的文件在项目窗口中作为原来序列的子文件出现。
c)编辑:从下拉菜单中选择“编辑” 命令用于注释的改名和重新定位。所作的变化将在注释窗口中以图表形式显示出来。
d)删除:从下拉菜单中选择“删除” 命令。经确认删除注释后,所作的变化将在注释窗口中以图表形式显示出来。
4.放大、缩小按钮
为了更仔细察看注释,选定注释上的紫色滑条并单击“Zoom In”按钮。如想恢复正常视点,单击“Zoom Out” 按钮。

5. 翻转序列按钮
单击这按钮将翻转选定的整个序列。翻转后的序列将在注释窗口和序列窗口中都可显示。再次单击翻转序列按钮将返回到原来的序列中。
6.改换大小写按钮
使用这一按钮来改变序列中选定部分的大小写格式。例如,如果你想要一个选择的部分以大写字母的形式出现,选定此部分后单击“改换大小写按钮”即可将你选定的序列从小写形式变成大写形式。再次单击此按钮,可恢复成原来的书写形式。
7.BLAST序列按钮
通过单击BLAST序列按钮可把一选择序列提交到NCBI的BLAST服务器。(如果在此前你已做了某些改动,此软件会询问你在序列被提交之前是否存储这一变化。)因特网面板随着你提交序列而被同时打开。单击“Format results”按钮,因特网面板将显示从发出信息到接收所需要的时间,一旦得到结果就在面板中显示出来。注:如果序列是DNA,BLAST 使用blastn格式,而序列是蛋白质,blastp则被使用。如果检索的结果不是很多,则此两种格式的内容同时在面板中显示出来。
8.翻译按钮
在项目窗口中,选择你希望翻译的序列。在操纵面板中,单击翻译按钮。从下拉菜单中选择与序列起始有关的阅读框架。一旦选择了阅读框架,序列就在序列窗口中自动地被翻译出来。为了增加其它的阅物框架,再一次单击翻译按钮,选择一种新的阅物框架。这样翻译的结果就在序列窗口中第一次翻译结果之下显示出来。例如对某一序列1~200个碱基,选择了add+1和add+2两个阅读框架先后进行翻译,其结果如图所示,两次翻译结果从上到显示出来:

图中星号(*)代表终止密码。为了保存翻译结果,单击“ACTIONS”菜单下的“Save Translation”命令,对话框询问你要存储哪个阅读框架的翻译结果?当你选择完毕后,单击“OK”,翻译后的序列文件在项目窗口中就作为原来文件的子文件。为了清除翻译结果返回到原来的序列,单击翻译按钮并从下拉菜单中选择“Remove all”命令即可消除翻译结果。
9.互补序列按钮
单击此按钮可在序列框架中显示与DNA或者RNA序列互补的序列结果。再次单击此按钮可返回到原来的序列。注:这按钮仅对DNA或RNA起作用。
10.发现ORF(开放式阅读框架)按钮
此按钮可找出100个碱基以上的开放式阅读框架的DNA序列。从项目窗口中选择序列,然后单击“Find ORFs”按钮。所有100个碱基以上的开放式阅读框架都被加以注释。
11.建立Oligo按钮
为了创建oligo, 在序列窗口中选定你想要的DNA序列 (必须是200个碱基以下的)。 单击建立Oligo按钮,Oligos面板显示出相关的oligo信息(在随后的Oligos面板说明中会有更详尽的解释)。你的oligo文件被自动地添加作为项目窗口中原来序列文件的子文件。

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 楼主| 郑振寰 发表于 2007-6-5 19:38 | 显示全部楼层

JellyFish基于母序列的名称和碱基的数量自动给oligo命名。你也可在项目窗口中单击其文件名,键入新的名称给oligo重命名。
12.搜索序列按钮
使用此按钮可以在你的序列之内搜索特异的子序列。在文本框中输入你搜索的内容,然后单击搜索按钮。第一个被检索出的序列在序列窗口中被突出显示出来。再次单击搜索按钮,下一个检索序列也显示出来,依此类推。
四、限制性酶切面板
这一面板用于创建序列限制性酶切产物的图谱。它是在注释窗口中用图表形式显示出来的。酶切位点在注释窗口下面的窗口中显示出来。如图所示:

1.限制性酶切面板窗口介绍:
a. 在“cut with”下可选择任意一组酶或者选择“Edit Sets”由你自己 编辑想要的酶。
缺省设置为:
My Favorite Enzymes包括有你自己选择的酶,在JellyFish 中已在此项中缺省加入了一些常用的限制酶。
All Enzymes包括已知的所有的限制酶。
Include Isoschizomers包括所有的限制酶和同裂酶。
Edit Sets 允许你自己编辑、添加、删除各种酶。如果你选择了“Edit Sets”,将会出现一个对话框,这样你就可以自己重组 “My Favorite Enzymes”。
单击“+”按钮可添加限制酶,单击“-”按钮可删除限制酶,直接在对话窗中选定“My Favorite Enzymes”可给其改名,单击对话窗右侧的“New Enzyme Set” 按钮 添加新的文件。如要删除文件,只需选择它,然后单击垃圾按钮 即可
b. 限制性酶切面板可让你选择限制酶使用的次数,如果你要特别规定某一限制酶使用的次数,只需键入相应的数字后打回车即可。
2.限制酶的图形化显示
a.在绿色线条表示的序列上,酶切位点以黑线形式存在于注释框架中。
b. 在序列窗口中滚动找到限制酶所在的位置。
C.通过将鼠标箭头放在限制酶名称上可察看识别序列和确切的切口位点(用黄色显示)。
d. 鼠标右键单击限制酶名称可了解与这种酶有关的消化缓冲液和其它的一些条件。
3.项目统计
单击消化统计按钮 可出现一窗口,在其中排列着每种限制酶使用的次数以及每一酶切位点的切割位置。

五、排序面板
这面板可通过鼠标点击将序列进行排序。排序规则采用NPS的Clustal W算法。
1.有两种方法可选择用于排序的序列:
a.在项目窗口中选择序列,用鼠标将其拖曳到排序窗口中;
b.在项目窗口中选择序列,在排序面板中单击“add”按钮。 添加其它序列可重复此过程。
2.单击“align”按钮 。
3.在出现的对话窗中输入排序的名称,单击“OK”,这时会出现安全注意窗口,它提醒序列数据将要被发出,询问你是否继续进行,单击“OK” 继续进行。
4.排序结果会在一新窗口中显示,为了对排序的序列重命名,可采用:
a.从“Actions”菜单中选择“Rename Sequences”。
b.在对话窗中输入新序列的名称。
5.当上述步骤完全后,排序就被添加到项目窗口中。
注:为了改变排序的颜色,选择“Actions”菜单下的“Set Colors”。
六、Oligos面板
此面板可显示在控制面板中建立的oligos文件的分析结果。你所选定的oligo序列在分析窗口的顶端出现。

如上图所示:在选定的Oligo序列上可见线性排列的核苷酸序列。通过单击核苷酸某一碱基可将其改为其它的碱基。
Oligo特性:
彩色方块代表所选Oligo序列中发夹结构(hairpins)、二聚体(dimers)、(runs)、回复子(repeats)所占比例的情况:
绿色:在oligo中没有找到hairpins, dimers, runs, or repeats
黄色:在oligo中发现有hairpins, dimers, runs, or repeats结构。
Oligo统计:
这个窗口显示与oligo有关的一些数据,包括Oligo长度,GC百分率,分子重量,Tm,dG,dH,dS,末端稳定性和GC发卡的情况。
Oligo定货:
单击“Sequence/Chemical Modifications”增加限制位点或者进行修饰。启动定货程序时,注明合成、净化和卖主情况,然后单击“Add to Shopping Cart”,在新出现的网页中选择你想要订购的Oligo即可完成订货。
七、PCR面板
使用此面板选择、修改并定购用于PCR的引物。下图是PCR面板的界面:

单击图中三个窗口("Forward Primer”“Product”或者“Reverse Primer")中的任意一个进行选择:

正向引物窗口(Forward Primer Window):
这个窗口允许你为正向引物设置参数。为了定位引物,选择“Exact”或者“Range”。然后在下面的序列窗口中选定正向引物。如果你选择“Exact”,确切的起始和终止位置就自动地在序列窗口中显示出来。如果你选择了“Range”,确切的起始和终止位置也自动地在序列窗口中显示出来,但你可通过键入想要的碱基对来修改其长度(缺省长度为18~27个碱基对)。
在正向和反向引物本窗口中,如果你有一预知序列,可在“Search for Primer”中键入此序列进行检索,JellyFish仅能找到与其精确匹配或补充的序列。
产物窗口(Product Window):
使用产物窗口设定产物的大小范围。在“Length”中输入相应的数字。
反向引物窗口(Reverse Primer Window):
这个窗口允许你为反向引物设置参数。其方法与设定正向引物方法一致。
修改选择参数按钮 (Modify Selection Parameters Button)
JellyFish以缺省参数设置引物。为了改变这些参数,单击“Modify Selection Parameters”修改选择参数按钮。在出现的窗口中输入变化的参数。如果你输入一无效的数值,错误信息将提醒你加以改正。如果想恢复缺省设置,通过单击恢复缺省设置按钮。
产生引物按钮 (Generate Primers button)
一旦你完成了参数设定,单击“Generate Primers”按钮。PCR面板显示在标题“Results”下设计的引物和产物,如下图所示

(如果你想返回到“Primer Design”窗口,在面板顶端单击“Primer Design”即可。)
每一个引物名从左到右依次为待测序列文件开始的3个字母,一个下划线,引物的起始和终止位置,一个下划线以及大写子母F或R。F或R分别代表引物是正向引物还是方向引物。例如图中的引物之一T_1-25_.F。
每一产品的名称同样也包括序列文件的头3个子母,产物的开始和终止位置。双击每一引物名可对引物进行重命名、创建序列或者进行化学修饰。
每一个oligo旁边的彩色方块代表该oligo的性质:
绿色:平均值之上
黄色:平均值
红色:平均值之下
双击某一彩色方块可看到其代表的引物或产物的完整性质初。在出现的下拉窗口中,该彩色方块代表的引物或产物的性质和分类一目了然。hairpins, dimers, runs, and repeats情况也十分清楚。单击hairpins, dimers, runs, and repeats右边的彩色方块可看见更详细的信息。
为了建立自己习惯的正向和反向组合,把相关引物拖拽至“create your own primer pairs Combination”,一个新的产物和分类就产生了。单击产物名称和彩色方块可了解进一步的信息。
Oligo订购:
使用这一命令来订购你已设计好的oligos。点击oligos名称选定你要订购的Oligos。选择合成、纯化和供应商。单击“Add to Shopping Cart”按钮。系统将要求你提供Biowire的口令,随后一个新的浏览器窗口打开,当你输入一些必要的信息后,Oligo订购即可完成。你也可以存储输入的信息以便在以后订购中不必再输入重复的信息。
八、备注面板
此面板可将项目窗口中的有关文件作一备注并进行存储。选择一序列,然后选择备注面板,这时将出现两个窗口,如图所示:

1.上面的窗口是选择序列项目的备注区域。右边的窗口显示关于项目序列的有关信息。
2.下面的窗口是选择序列的备注区域。它右边的窗口显示相关序列的一些信息。你能随时编辑备注并存储它们。
九、Genbank面板
如果某一序列是从Genbank中下载的或是从Genbank中导出的,此面板可显示相关的Genbank记录。如果选择的序列不是来自于Genbank,这面板将是空白的。
注:你在控制面板中所作的注释将不能在Genbank记录中被反映出来。
十、统计面板
使用此面板可对选定序列的碱基组成进行统计,并能计算选定序列的分子重量和长度
十一、网络工具面板
此面板显示与项目窗口中选择序列有关的网络工具。
为了执行BLAST检索或者其它基于网络的序列分析:
1.单击你要使用的网络工具搜索按钮,可同时使用多种网络工具执行多重搜索。
2.当搜索进行时,搜索栏上可显示连接图标。
3.当搜索被完成时,检索标记显示在搜索栏中。
4.单击检查标记察看结果,这时因特网面板或外部浏览器被打开,相关结果在其中显示出来。
5. 在项目窗口中单击序列名称可返回到你的网络工具面板中,分析结果作为被分析序列的子文件存在于项目窗口中。
网络工具连接:
每一网络工具的名字都是一个衔接,如果你单击各网络工具名称,就会直接进入网络工具所在的主页中,在其中序列被添加搜索页中并进行检索。(单击搜索图标可除去这个步骤并直接进入结果页中。)只有被Biowire选择的网络工具才在网络工具面板上可供使用的。其它的工具将由你自己进行添加。用户可通过电子邮件jellyfish@biowire.com与此软件设计师联系将一些网络工具加入到JellyFish中。
十二、Internet 面板
这面板是JellyFish自己内部的浏览器。在缺省设置时是关闭的,你能通过在工具菜单中设定工具而激活它(即使它作为JellyFish窗口中的一个面板),Internet面板显示从网络搜索工具检索所得的结果。通常这些结果是在外部浏览器中自动地打开的。你也可使用Internet面板进行网络冲浪:在底部的地址栏中输入正确的网络地址即可。
十三、菜单中的一些重要工具
FILE
“Export as JPEG”允许你以图象文件的格式进行存储。
TOOLS
使用“Configure Tools”选择你想要在主窗口中出现的面板,例如,如果你不需要Oligos面板,你可通过选择“Configure Tools”掩藏这个面板。
ACTIONS
环状注释(Circular Annotations):选择actions菜单下的“Make Circular”,当前序列将以环形代替线性进行分析。在控制面板上,当选择了“Make Circular”,单击“Find ORF”按钮后,ORF以环形序列的形式出现。在限制酶面板中,当选择了“Make Circular”,消化产物统计以环状形式显示正确的序列大小。如果想将分析结果改回线性,在“ACTIONS”菜单中选择“Make Linear”。
以上就是JellyFish 软件的大略介绍,其中还有很多的功能由于时间问题没有介绍,这需要我们在以后的工作中自己加以体会。无论怎样,JellyFish作为一功能强大的软件包,将在我们工作中发挥更大的作用。

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